間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合明膠微冰膠材料對(duì)皮膚損傷治療的可行性研究.pdf

1、第一部分、明膠微冰膠支架有利于脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞體外干性維持并提高其體內(nèi)應(yīng)用價(jià)值
　　目的:研究人脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)與明膠微冰膠材料體外聯(lián)合培養(yǎng)時(shí)，材料是否能維持間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性。
　　方法:ADSCs種植于明膠微冰膠材料后進(jìn)行Calcein-AM和PI活細(xì)胞染色檢測(cè)細(xì)胞活力，細(xì)胞滴度藍(lán)法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，定量PCR檢測(cè)干性基因OCT4、Nanog、 SOX2表達(dá)情況，以及在成脂成骨誘導(dǎo)過(guò)程比較AD

2、SCs在普通環(huán)境和種植于明膠微冰膠材料后分化潛能。
　　結(jié)果:ADSCs在三維明膠微冰膠支架材料中能保持較高活性，增殖能力不受影響，干性基因表達(dá)上調(diào)，但成脂成骨分化相關(guān)基因表達(dá)水平比普通誘導(dǎo)環(huán)境低。
　　結(jié)論:明膠微冰膠可以為ADSCs提供一個(gè)較二維培養(yǎng)更好的微環(huán)境，有利于ADSCs體外干性維持，從而在干細(xì)胞移植法治療相關(guān)疾病時(shí)以非侵入性的細(xì)胞傳遞方式發(fā)揮更長(zhǎng)期的應(yīng)用價(jià)值。
　　第二部分、脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞和明膠微冰

3、膠支架以輸注方式傳遞到體內(nèi)可提高裸鼠外科皮膚創(chuàng)傷愈合
　　目的:研究間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合三維可降解明膠微冰膠支架材料能否提高ADSCs對(duì)皮膚損傷的治療效果。
　　方法:裸鼠制作成全厚皮膚切割傷模型，按背部皮膚正方形創(chuàng)面上注射細(xì)胞或材料不同隨機(jī)分成四組:未處理陰性對(duì)照組(sham)、細(xì)胞組(ADSCs)、材料組(GMs)、細(xì)胞+明膠微冰膠組(ADSCs+GMs)，觀察創(chuàng)傷愈合情況。Real-time PCR、Western blo

4、t和ELISA檢測(cè)組織勻漿生長(zhǎng)因子VEGF、HGF、PDGFbb、bFGF、EGF基因和蛋白表達(dá)情況，活體成像實(shí)驗(yàn)和抗人細(xì)胞核免疫熒光染色追蹤細(xì)胞體內(nèi)存活和停留情況，H&E染色觀察皮膚創(chuàng)傷組織表皮和真皮愈合質(zhì)量，免疫組化染色PCNA和CK14檢測(cè)真皮和表皮再生情況，GFP陽(yáng)性ADSCs和CK5、Hsp47、NG2和CD31共定位檢測(cè)細(xì)胞是否通過(guò)轉(zhuǎn)分化成皮膚角質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、周細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)損傷。
　　結(jié)果:ADSCs+

5、GMs組皮膚創(chuàng)傷愈合優(yōu)于ADSCs組、GMs組和sham組。創(chuàng)傷皮膚組織中生長(zhǎng)因子VEGF、HGF、bFGF、EGF、PDGFbb表達(dá)量隨時(shí)間不同程度上調(diào)，ADSCs+GMs組高于其他各組，ADSCs+GMs組的細(xì)胞在裸鼠組織中存活和停留時(shí)間較ADSCs組更好，ADSCs+GMs組創(chuàng)傷組織表皮和真皮再生能力較其他各組更好，血管形成數(shù)量更多。
　　結(jié)論:ADSCs和明膠微冰膠支架二者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，明膠微冰膠支架為ADSCs功能發(fā)揮提供