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1、利用間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)向腫瘤組織遷移的特性,探討通過(guò)篩選的MSCs親和肽(P1)連接基質(zhì)金屬蛋白酶底物肽(P2)及藥物實(shí)現(xiàn)以MSCs為載體的靶向治療的可行性。 采用噬菌體肽庫(kù)技術(shù),用分離培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞篩選噬菌體環(huán)七肽庫(kù),最終獲得MSCs高親和性多肽。為了便于檢測(cè),合成此親和性多肽(PI)及FITC與生物素(Biotin)標(biāo)記的親和肽。在熒光顯微鏡下觀察可見(jiàn)FITC標(biāo)記的親和肽與MSCs結(jié)合后,細(xì)胞表面呈現(xiàn)綠色熒
2、光。流式細(xì)胞儀檢測(cè)FITC標(biāo)記多肽與MSCs的結(jié)合率為99.8%,熒光強(qiáng)度為陰性對(duì)照的29.7倍。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示,生物素標(biāo)記親和肽(Bio-PD與MSCs的結(jié)合強(qiáng)度為空白對(duì)照的4.05倍,說(shuō)明Bio-P1與MSCs具有良好的親和性。將MSC_Bio-P1植入裸鼠腫瘤組織旁側(cè),4天后剪切腫瘤組織進(jìn)行冰凍切片免疫組化分析,結(jié)果顯示MSCs陽(yáng)性染色,說(shuō)明生物素標(biāo)記親和肽與MSCs在體內(nèi)有良好的親和性與穩(wěn)定性。 通過(guò)接種9
3、L膠質(zhì)瘤細(xì)胞建立了大鼠腦膠質(zhì)瘤模型,采用RT-PCR技術(shù)、免疫組織化學(xué)和明膠酶譜等方法檢測(cè)9L膠質(zhì)瘤細(xì)胞及腦膠質(zhì)瘤組織中明膠酶MMP-2和MMP-9的活性變化。結(jié)果顯示在膠質(zhì)瘤細(xì)胞及腫瘤組織中均可檢測(cè)到MMP-2和MMP-9的表達(dá),且隨著腫瘤的生長(zhǎng),MMP-2和MMP-9的表達(dá)量逐漸增高。為MSCs在靶部位釋藥奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),同時(shí)為MM?s抑制劑的篩選提供了可參考的動(dòng)物模型。 合成了FITC標(biāo)記的親和肽與基質(zhì)金屬蛋白酶底物肽(P
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