骨髓間充質(zhì)干細胞移植對兔放射性肺損傷治療的研究.pdf

1、第一部分兔骨髓間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)及標記
　　目的：探討兔骨髓間充質(zhì)干細胞的體外分離培養(yǎng)和標記方法,為進一步的實驗研究打下基礎(chǔ)。
　　方法：無菌條件下取下兔子雙側(cè)股骨,獲取骨髓后全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞;倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài),采用細胞計數(shù)方法繪制傳代培養(yǎng)的生長曲線;DAPI標記干細胞,免疫熒光顯微鏡觀察熒光標記率,比較干細胞標記前后的生長情況。
　　結(jié)果：體外培養(yǎng)的兔骨髓間充質(zhì)干細胞為貼壁生長,長

2、梭形,可形成漩渦樣結(jié)構(gòu);DAPI標記骨髓間充質(zhì)干細胞后細胞核呈藍色熒光,標記后干細胞生長狀態(tài)良好,其生長特性和狀態(tài)無明顯改變。
　　結(jié)論：全骨髓培養(yǎng)法可獲得純度較高的骨髓間充質(zhì)干細胞干細胞,原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的BMSCs具有較好的增值能力;DAPI可成功標記兔骨髓間充質(zhì)干細胞,對干細胞生長無影響。
　　第二部分兔慢性放射肺損傷模型的建立及鑒定
　　目的：探討建立與臨床時間情況相符的慢性肺損傷動物模型的可行性,為進一步實

3、驗研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：新西蘭白兔12只,分成右全肺照射組(n=8)和正常對照組(n=4),按SAD定角等中心照射技術(shù)照射建立慢性放射右全肺損傷兔模型,并于照射后第2、4、8w行CT及病理學(xué)檢查。
　　結(jié)果：照射后4w內(nèi),CT和病理學(xué)檢查呈急性肺炎表現(xiàn);照射8w后,CT可見條索樣改變,而HE染色鏡下檢查則見肺泡壁增厚呈纖維化改變,Masson染色見肺間質(zhì)膠原纖維增多。
　　結(jié)論：按SAD定角等中心照射技術(shù)建立兔慢性

4、放射肺損傷模型是可行的。
　　第三部分骨髓間充質(zhì)干細胞對兔放射性肺損傷治療的研究
　　目的：探討骨髓間充質(zhì)干細胞對慢性放射肺損傷的治療作用及相關(guān)作用機制。
　　方法：全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細胞并用DAPI標記;建立兔慢性放射右全肺損傷模型,分為治療組和對照組;將DAPI標記好的BMSCs經(jīng)耳緣靜脈注射入治療組動物體內(nèi);在治療后第2d,2w,5w、10w四個時間點,每組處死相同比例的實驗動物,取其肺臟,行冰凍

5、切片、免疫組化等檢測研究干細胞對肺損傷的治療作用及機制。
　　結(jié)果：干細胞移植后第2d,治療組右肺組織冰凍切片可見明顯標記干細胞,左肺見極少量標記干細胞,而對照組未見標記干細胞;2w時標記干細胞數(shù)量減少;HE染色可見實驗組的肺纖維化程度較對照組明顯減輕;免疫組化可見治療組肺泡上皮凋亡因子Bax較對照組表達明顯減弱,而凋亡抑制因子Bcl-2則較對照組表達增強。
　　結(jié)論：骨髓間充質(zhì)干細胞可向放射損傷的肺組織聚集,并可減輕放射肺