NDV對(duì)SCID鼠體內(nèi)人食管癌移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用研究.pdf

1、目的：2002年，我國(guó)衛(wèi)生部批準(zhǔn)中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)科技部負(fù)責(zé)組織臨床實(shí)施ATV-NDV（新城疫病毒修飾自體腫瘤細(xì)胞疫苗）的臨床應(yīng)用研究。我國(guó)少部分省市開(kāi)始了對(duì)胃癌、腸癌治療的臨床試驗(yàn)，觀察到了較好的療效，但對(duì)食管癌的治療鮮有報(bào)導(dǎo)，因而作為ATV-NDV治療食管癌的臨床應(yīng)用研究的一部分，我們課題組做了NDV（新城疫病毒）對(duì)食管癌的體內(nèi)作用研究。
　　 食管癌傳統(tǒng)的治療方法多為手術(shù)、放療、化療等，這些方法對(duì)機(jī)體產(chǎn)生創(chuàng)傷或毒副作用比

2、較明顯，患者預(yù)后較差，治療效果不佳，5年生存率低于20％。如何延長(zhǎng)食管癌患者術(shù)后生存期，降低并發(fā)癥，提高生存質(zhì)量是目前食管癌臨床治療中迫切需要解決的問(wèn)題。NDV以其對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷作用，同時(shí)又兼具體內(nèi)應(yīng)用的高效性的特點(diǎn)，成為腫瘤生物治療研究的熱點(diǎn)。NDV抗腫瘤研究現(xiàn)已進(jìn)入Ⅰ期臨床階段，但其抗腫瘤機(jī)制仍是限制其進(jìn)行大規(guī)模臨床應(yīng)用的主要因素。本課題組通過(guò)建立荷食管癌SCID鼠移植瘤模型，初步探討了NDV在荷食管癌SCID鼠體內(nèi)環(huán)境中誘

3、導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的途徑、機(jī)制。通過(guò)檢測(cè)NDV治療后荷瘤小鼠移植瘤的各項(xiàng)指標(biāo)，及其肝臟、腎臟、心肌等器官的功能，肯定了NDV對(duì)食管癌細(xì)胞具有選擇性殺傷作用并在治療食管癌方面具有安全性、可行性。
　　 方法：建立荷食管癌SCID鼠移植瘤模型：鈷60照射后肌肉注射環(huán)磷酰胺的方法對(duì)SCID鼠做預(yù)處理，用一次性無(wú)菌注射器抽取0.1ml的食管癌細(xì)胞懸液，注入實(shí)驗(yàn)SCID鼠右腿內(nèi)側(cè)皮下，每只鼠設(shè)1個(gè)皮下接種點(diǎn)，約含5×106個(gè)食管癌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)

4、胞。
　　 成瘤后的SCID鼠模型進(jìn)行分組：陰性對(duì)照組（生理鹽水治療）、NDV治療組(NDV治療)、陽(yáng)性對(duì)照組（5-Fu治療）。對(duì)各組荷瘤鼠進(jìn)行治療并觀察其體重、腫瘤體積等指標(biāo)。21天后處死全部鼠：稱量裸瘤和脾臟質(zhì)量，計(jì)算抑瘤率和脾臟指數(shù)，進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)；血液監(jiān)測(cè)白細(xì)胞數(shù)、肝功能、腎功能、心肌酶等指標(biāo)。評(píng)價(jià)NDV治療對(duì)SCID鼠多個(gè)臟器功能的影響；對(duì)腫瘤組織、肝臟、胸腺、脾臟做病理切片，HE染色后觀察光鏡下病理變化；對(duì)NDV治療后

5、的SCID鼠腫瘤組織提取DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，初步探討了NDV對(duì)食管癌的體內(nèi)作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1.NDV組抑瘤率均為34％，陽(yáng)性對(duì)照組的抑瘤率為41％。
　　 2.治療后脾臟質(zhì)量和脾指數(shù)：NDV組和陰性對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)；NDV組脾重和脾指數(shù)均高于陽(yáng)性對(duì)照組，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 3.治療后SCID鼠血液白細(xì)胞數(shù)、肝功能、腎功能、心

6、肌酶等指標(biāo)比較：多數(shù)指標(biāo)NDV組和陰性對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)；NDV組多數(shù)指標(biāo)均低于陽(yáng)性對(duì)照組，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 4.病理切片HE染色，光鏡觀察結(jié)果顯示：陰性對(duì)照組瘤細(xì)胞個(gè)體完整，細(xì)胞較密集，死亡區(qū)域少，范圍較小，單個(gè)細(xì)胞胞核整齊統(tǒng)一、染色清晰、核膜完整、可見(jiàn)核仁、細(xì)胞漿清亮、細(xì)胞質(zhì)邊界明顯；NDV組腫瘤細(xì)胞死亡區(qū)域較多，有成片狀死亡、整體形態(tài)模糊，核大小不等、固縮明顯，核膜溶解、核仁消失、胞

7、漿染色不清亮，細(xì)胞質(zhì)邊界不清晰，分裂相少見(jiàn)；陽(yáng)性對(duì)照組腫瘤細(xì)胞死亡范圍大，有大量成片狀死亡區(qū)域，細(xì)胞形態(tài)相對(duì)完整，細(xì)胞核大小不均、核深染，部分細(xì)胞核膜完整，可見(jiàn)核仁、胞漿著色深且模糊、細(xì)胞質(zhì)界限清晰。取各組荷瘤SCID鼠的肝臟組織、胸腺組織切片進(jìn)行HE染色，未發(fā)現(xiàn)有明顯病理區(qū)別。
　　 5.瓊脂糖凝膠電泳顯示NDV組腫瘤組織中提取的DNA片段降解，表現(xiàn)為梯形DNA電泳條帶，說(shuō)明食管癌細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)論：