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文檔簡介
1、目的:研究miR-21對(duì)大腸癌HT-29細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,觀察細(xì)胞對(duì)5-Fu及放射線敏感性的變化。
方法:轉(zhuǎn)染pre-miR-21慢病毒組為實(shí)驗(yàn)組,HT-29細(xì)胞組為空白對(duì)照組,轉(zhuǎn)染無義序列NC慢病毒和U6慢病毒為陰性對(duì)照組。構(gòu)建pre-miR-21慢病毒載體,熒光顯微鏡下評(píng)估轉(zhuǎn)染情況,Taqman Real-time PCR檢測轉(zhuǎn)染前后miR-21表達(dá)變化,采用CCK-8法檢測miR-21對(duì)細(xì)胞增殖能力影響,流式細(xì)胞儀檢
2、測細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞周期分布情況及凋亡能力,細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞克隆形成能力,Transwell小室法觀察細(xì)胞體外侵襲力。CCK-8法檢測細(xì)胞對(duì)5-FU化療敏感性變化,并計(jì)算各組半數(shù)抑制率(IC50),MMT法檢測細(xì)胞對(duì)放療敏感性。每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。
結(jié)果:實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示pre-miR-21慢病毒組miR-21表達(dá)升高4.228倍(p<0.01)。與空白對(duì)照組和兩組陰性對(duì)照組相比,上調(diào)miR-21表達(dá)明顯促進(jìn)
3、HT-29細(xì)胞增殖(p<0.01);克隆形成能力顯著增強(qiáng)(559±19 vs375.67±21.01p<0.01);細(xì)胞凋亡減少(p<0.05),早期凋亡(1.1±0.26 vs6.67±0.81)%,晚期凋亡和死亡細(xì)胞(1.33±0.85 vs5.53±1.1)%;細(xì)胞周期重新分布,G0/G1期向S期轉(zhuǎn)換,G0/G1期細(xì)胞比例明顯降低(36.53±0.92 vs60.18±0.93)%(p<0.01),S期細(xì)胞比例升高(56.8±1.
4、02 vs33.0±1.01)%(p<0.01),G2/M期細(xì)胞比例無差異;細(xì)胞體外侵襲能力增強(qiáng)(穿膜細(xì)胞數(shù)104.8±6.72 vs34.2±2.59,p<0.01);miR-21抵消部分5-FU化療作用使化療敏感性降低,上調(diào)組IC50(232.73±21.69μg/ml)是空白對(duì)照組(112.46±15.26μg/ml)的2.07倍(p<0.01),細(xì)胞對(duì)X線放療抑制率降低(16.76±1.87 vs36.14±1.54)%(p<0
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