富含半胱氨酸酸性分泌糖蛋白及其肽段對(duì)人系膜細(xì)胞增殖和凋亡作用的研究.pdf

1、目的： 研究富含半胱氨酸酸性分泌糖蛋白(SPARC)的全長(zhǎng)蛋白及其2.1肽段對(duì)人腎小球系膜細(xì)胞(HMC)增殖、凋亡和細(xì)胞周期調(diào)控蛋白表達(dá)以及細(xì)胞外基質(zhì)mRNA表達(dá)的影響。 方法 應(yīng)用的技術(shù)包括噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞增殖、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、Western blot檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白cyclinD1和P21<'Wafl>的表達(dá)、透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化、Annexin WPI雙染色方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡指數(shù)

2、、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)(ColI、ColIV、LN、FN)mRNA的水平、夾心ELISA法對(duì)IgAN 患者和正常人血液和尿液中SPARC和細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6進(jìn)行定量檢測(cè)、免疫組織化學(xué)檢測(cè)SPARC在IgAN患者及正常人腎組織中的表達(dá)及分布等。 結(jié)果 (1)SPARC及其肽段能夠抑制HMC增殖，呈良好的時(shí)效與量效關(guān)系；(2)SPARC及其肽段可使HMC的細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期

3、，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，電鏡下可見(jiàn)典型的凋亡小體；(3)SPARC及其肽段對(duì)HMC細(xì)胞周期調(diào)控蛋白的表達(dá)有影響，使CyclinD1的表達(dá)明顯減弱、P21<'Wafl>的表達(dá)明顯增強(qiáng)；(4)SPARC及其肽段可使細(xì)胞外基質(zhì)ColI、ColIV、FN mRNA 的表達(dá)明顯下調(diào)；(5)SPARC在IgA腎病小管上皮細(xì)胞中表達(dá)明顯增強(qiáng)；(6)IgAN患者血液和尿液中的SPARC含量顯著高于正常人；IgAN患者血液中的炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β