11938.海燕內(nèi)臟腦苷脂的分離純化及抗腫瘤活性研究

1、分類號分類號密級UDC編號碩士學(xué)位論文海燕內(nèi)臟腦苷脂的分離純化及抗腫瘤活性研究左海嬌（1132020）指導(dǎo)教師姓名李智博副教授專業(yè)名稱食品科學(xué)論文答辯日期2014年5月31日學(xué)位授予日期2014年6月摘要I摘要在我國，海星綱種類繁多，資源豐富，其繁殖和適應(yīng)能力很強，但其食用價值不高，同時是養(yǎng)殖貝類的天敵。海燕是海星綱的一種，其體內(nèi)含有很多具有生物活性的物質(zhì)，成為研究的熱點。腦苷脂是海燕內(nèi)臟中一種活性很強的內(nèi)源性物質(zhì)，具有調(diào)控細(xì)胞生長、抗

2、腫瘤、抗菌、抗病毒、抗?jié)?、免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)保護等作用。目前，對腦苷脂的抗腫瘤活性研究已成為國際主流，有望開發(fā)成為輔助治療腫瘤疾病的新藥。本文以海燕內(nèi)臟為原料，采用有機溶劑浸提的方法提取腦苷脂，利用硅膠層析法結(jié)合薄層層析法對腦苷脂進(jìn)行分離純化，對分離純化后的腦苷脂進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，以純化后的腦苷脂為標(biāo)準(zhǔn)品利用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法對其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，并研究其抗腫瘤活性。得到的主要研究結(jié)果如下：1、對海燕內(nèi)臟干粉采用95%乙醇室溫下浸提

3、，通過薄層層析法(TCL)鑒定得到腦苷脂粗品，再通過硅膠層析多次對粗腦苷脂進(jìn)行分離純化，根據(jù)TCL顯示結(jié)果確定腦苷脂得到純化。2、采用紅外光譜分析對分離純化后得到的腦苷脂進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，得到所提取出的腦苷脂含有如下結(jié)構(gòu)：CH、表明酰胺鍵的C=O和NH、CO、CH2以及長脂肪鏈。通過高分辨質(zhì)譜分析，得到可能的相對分子質(zhì)量為790.6439804.6601和818.6752，與之對應(yīng)的分子式為C44H87O10N，C45H89O10N和C46

4、H91O10N。3、通過單因素和正交實驗優(yōu)化海燕內(nèi)臟中提取腦苷脂的條件，結(jié)果表明，最佳的提取條件為：室溫下，正己烷與乙醇混合比例為2:1(VV)，料液比為1:20(WV)，提取時間為3天，提取次數(shù)為2次，此條件下腦苷脂的相對提取率可達(dá)到87.67%。4、對分離得到的腦苷脂進(jìn)行體外抗腫瘤活性實驗，MTT結(jié)果表明，在劑量為10~400μgml范圍內(nèi)，腦苷脂可抑制人肝癌細(xì)胞(BEL7402)、人宮頸癌細(xì)胞(HeLa)和人乳腺癌細(xì)胞(MCF7)

5、的生長，基本具有時間、劑量的依賴性。人乳腺癌細(xì)胞(MCF7)培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的檢測結(jié)果與MTT結(jié)果基本保持一致，腦苷脂劑量越大，細(xì)胞LDH漏出越多，LDH活性越高，說明腦苷脂破壞了MCF7細(xì)胞的細(xì)胞膜，使其通透性增加。5、從細(xì)胞凋亡的角度研究了腦苷脂的抗腫瘤作用機理。通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察（倒置顯微鏡和熒光染色觀察）可以看出，腦苷脂可以使MCF7細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞形狀變圓，細(xì)胞折光度下降，同時伴隨有染色質(zhì)固縮、細(xì)胞核呈致密