照射時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)鼻咽癌放射生物學(xué)效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分照射時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)小鼠鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞殺滅作用的影響
　　 目的：模擬精確放療照射模式，觀察照射時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)小鼠鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞殺滅作用的影響及相關(guān)基因蛋白Bcl-2，Bax表達(dá)的變化。
　　 方法：荷鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞雄性小鼠隨機(jī)分成4個(gè)組，每組10只:假照組，常規(guī)照射組，IMRT模擬組，IGRT模擬組。小鼠用10％水合氯醛(350 mg/kg，腹腔注射)麻醉后固定于平板上，利用瓦里安23-EX加速器

2、進(jìn)行一次性腫瘤靶區(qū)照射，6MV-X線，照射野給于1cm厚組織補(bǔ)償，總劑量18Gy，劑量率6Gy/min。(1)常規(guī)照射組分3次照射，每次1min，總時(shí)間6min。(2)模擬IMRT組照射總時(shí)間15 min。(3)模擬IGRT組照射總時(shí)間30 min。各模擬照射組所受照射劑量同于常規(guī)照射組，放療物理師按照實(shí)際放療的模式進(jìn)行計(jì)劃設(shè)計(jì)，分別對(duì)各個(gè)照射劑量點(diǎn)進(jìn)行照射，每個(gè)劑量點(diǎn)分7次照射，照射完成總時(shí)間分別為15min和30min。24小時(shí)后全

3、部小鼠脫頸處死，切取腫瘤迅速用10％中性緩沖福爾馬林液固定，常規(guī)脫水、透明、包埋，石蠟切片，用TUNEL法測(cè)細(xì)胞凋亡指數(shù)，并免疫組化法測(cè)凋亡相關(guān)基因蛋白bax和bcl-2。
　　 結(jié)果：1.各組凋亡指數(shù)差異明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。其中假照組的凋亡指數(shù)最低，常規(guī)照射組的凋亡指數(shù)最高。IMRT模擬組，IGRT模擬組與常規(guī)照射組比較，凋亡指數(shù)降低，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01); IMRT模擬組與IGRT模擬組之間差別

4、無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.05);各照射組與假照組比較，凋亡指數(shù)均增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。2.Bcl-2蛋白的半定量測(cè)定結(jié)果各組間均有差別。其中假照組的Bcl-2蛋白含量最高，常規(guī)照射組最低;常規(guī)照射組，IMRT模擬組，IGRT模擬組與假照組比較，Bcl-2蛋白含量均降低差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01); IMRT模擬組，IGRT模擬組與常規(guī)照射組之間比較，Bcl-2蛋白含量高，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.22)。3.各組B

5、ax蛋白的半定量測(cè)定結(jié)果均有差別。其中假照組的Bax蛋白含量最低，其余各照射組與Bax蛋白含量均增高;IMRT模擬組，IGRT模擬組與常規(guī)照射組之間比較，Bax蛋白含量降低;IGRT模擬組較IMRT模擬組Bax蛋白含量低;差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：高能X線照射時(shí)間延長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致對(duì)小鼠鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞殺傷作用降低，具體表現(xiàn)在細(xì)胞凋亡指數(shù)下降，Bax升高程度與Bcl-2降低程度減小。提示在實(shí)際放射治療過程中應(yīng)

6、該適當(dāng)增加總照射劑量來彌補(bǔ)放射生物效應(yīng)的損失。
　　 第二部分照射時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)小鼠鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞MMP-9及E-cadherin表達(dá)的影響
　　 目的：模擬精確放療照射模式，觀察照射時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)小鼠鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）及E-鈣黏附素(E-cadherin)表達(dá)的影響。
　　 方法：荷鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞雄性小鼠隨機(jī)分成4個(gè)組，每組10只:假照組，常規(guī)照射組，IMRT模擬組，

7、IGRT模擬組。小鼠用10％水合氯醛(350 mg/kg，腹腔注射)麻醉后固定于平板上，利用瓦里安23-EX加速器進(jìn)行一次性腫瘤靶區(qū)照射，6MV-X線，照射野給于1cm厚組織補(bǔ)償，總劑量18Gy，劑量率6Gy/min。(1)常規(guī)照射組分3次照射，每次1min，總時(shí)間6min。(2)模擬IMRT組照射總時(shí)間15min。(3)模擬IGRT組照射總時(shí)間30 min。各模擬照射組所受照射劑量同于常規(guī)照射組，放療物理師按照實(shí)際放療的模式進(jìn)行計(jì)劃設(shè)

8、計(jì)，分別對(duì)各個(gè)照射劑量點(diǎn)進(jìn)行照射，每個(gè)劑量點(diǎn)分7次照射，照射完成總時(shí)間分別為15 min和30min。24小時(shí)后全部小鼠脫頸處死，取出腫瘤迅速用10％中性緩沖福爾馬林液固定，常規(guī)脫水、透明、包埋，石蠟切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。用免疫組化測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MMP-9及E-cadherin。
　　 結(jié)果：各照射組與假照組比較，MMP-9均降低，E-cadherin均增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;IMRT模擬組，IG

9、RT模擬組MMP-9表達(dá)較常規(guī)照射組有所升高，其差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;IMRT模擬組，IGRT模擬組E-cadherin表達(dá)較常規(guī)照射組有所下降，其差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01)。IMRT模擬組與IGRT模擬組MMP-9表達(dá)與E-cadherin表達(dá)無明顯差異。
　　 結(jié)論：高能X線在一定的范圍內(nèi)，相同劑量下延長(zhǎng)照射時(shí)間可導(dǎo)致MMP-9表達(dá)升高，E-cadherin表達(dá)降低，進(jìn)而導(dǎo)致放射治療抑制鼻咽癌CNE-2Z細(xì)