Ad-OSM對鼻咽癌抑癌效應(yīng)的實驗研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　 鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)是我國南方、越南、菲律賓等其它南亞國家高發(fā)腫瘤之一，廣東、廣西、福建、湖南等省為國內(nèi)高發(fā)區(qū)，部分地區(qū)高達30/10萬～50/10萬，調(diào)整死亡率分別為6.47/10萬、4.92/10萬、3.28/10萬、3.22/10萬，亦居世界首位（調(diào)整死亡率2.88/10萬）。男性發(fā)病率約為女性的2～3倍,40～50歲為高發(fā)年齡組。鼻咽癌的發(fā)病率和死亡率均

2、隨年齡增長而上升。鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展是一個多因素作用、多基因參與、多階段病變發(fā)生的極其復(fù)雜的癌變過程，基因治療作為一種高效性、特異性、靶向性的治療手段已是醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的熱點。近年來研究發(fā)現(xiàn)，抑瘤M(OncostatinM，OSM)基因?qū)δ[瘤細胞具有生長抑制作用和靶向誘導(dǎo)凋亡的功能。本項實驗擬采用以腺病毒為載體的OSM基因，觀察其對該鼻咽癌細胞及裸鼠移植瘤的抑癌效應(yīng)，并對其可能機理進行了探討，為將來運用Ad-OSM應(yīng)用于臨床提供實驗依據(jù)。

3、
　　 方法：
　　 體外：將Ad-OSM體外感染CNE-2Z鼻咽癌細胞，運用RT-PCR及Westernblot檢測OSM基因在CNE-2Z細胞中的轉(zhuǎn)錄及表達；MTT法和Annexin-V-PE/7-AAD雙染色的FCM檢測PBS、Ad-GFP、Ad-OSM體外抑制鼻咽癌細胞生長和誘導(dǎo)凋亡的抑癌增效效應(yīng)；PI染色的FCM檢測Ad-OSM對鼻咽癌細胞周期的影響；運用RT-PCR檢測P21、P27、Bcl-2、Surviv

4、in等以分析Ad-OSM誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡可能的分子機制；Westernblot檢測Ad-OSM對CNE-2Z細胞中cleavedCaspase-3的表達的影響。體內(nèi)：用CNE-2Z細胞構(gòu)建裸鼠移植瘤，在鼻咽癌的裸鼠移植瘤動物模型上，運用免疫組化方法檢測CNE-2Z鼻咽癌移植瘤生長相關(guān)因子的表達：(1)P21、P53、Bax、Caspase-3、等促凋亡因子；(2)Bcl-2、Cox-2等凋亡抑制因子。
　　 結(jié)果：
　　

5、 RT-PCR和Westernblot檢測證實腺病毒介導(dǎo)的OSM基因可以在CNE-2Z細胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄及表達；Ad-OSM體外能明顯抑制CNE-2Z鼻咽癌癌細胞的生長，引起G1期阻滯和誘導(dǎo)細胞凋亡(P＜0.05)。體內(nèi)也能明顯抑制CNE-2Z裸鼠鼻咽癌移植瘤的生長。分子機制檢測結(jié)果表明：Ad-OSM能明顯上調(diào)CNE-2Z鼻咽癌細胞P21、P27、P53、Bax、Caspase-3和下調(diào)Cox-2、Bcl-2、Survivin等細胞周期和凋