同種異體大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合電刺激治療下肢慢性缺血的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分同種異體大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療下肢慢性缺血的實(shí)驗(yàn)研究 目的：研究同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在后肢缺血大鼠缺血肌肉組織內(nèi)存活、遷移、分化情況。評(píng)價(jià)同種異體骨髓問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞移植的治療性血管生成作用及治療下肢慢性缺血的效果。 方法：分離、純化、擴(kuò)增培養(yǎng)雄性wistar大鼠的MSCs，并用Brdu標(biāo)記。20只Wistar大鼠，體重200-250g。經(jīng)左股總動(dòng)脈切斷后制成后肢缺血模型再隨機(jī)分成2組：A缺血對(duì)照組，BMS

2、Cs移植組：大鼠股動(dòng)脈切斷后7天接受同種異體MSCs移植治療(5×106MSCs／100μl，分6點(diǎn)注入大腿缺血的肌肉)。治療3周后分別對(duì)缺血對(duì)照組、MSCs移植組進(jìn)行了血管造影、皮溫測(cè)定、新生血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)及毛細(xì)血管密度的測(cè)定。 結(jié)果：同種異體大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可在后肢缺血大鼠缺血肌肉組織內(nèi)存活、遷移、分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞形成新生血管；血管造影發(fā)現(xiàn)MSCs移植組治療后側(cè)枝循環(huán)明顯增加。下肢皮溫測(cè)定發(fā)現(xiàn)缺血的左下肢同正常的右下

3、肢之間的溫差，治療組均較缺血對(duì)照組顯著降低，(2．66±O．17vs1．04±0．23，P

4、有治療性血管生成作用。 第二部分低頻閾下電刺激對(duì)缺血后肢VEGF和Angio-l表達(dá)的影響 目的：研究電刺激對(duì)后肢缺血大鼠VEGF及Anglo一1表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。評(píng)價(jià)電刺激的治療性血管生成作用及治療下肢慢性缺血的效果。 方法：20只Wistar大鼠，體重200—250g。經(jīng)左股總動(dòng)脈切斷后制成后肢缺血模型再隨機(jī)分成2組：A缺血對(duì)照組，B電刺激組：大鼠股動(dòng)脈切斷后7天，于大腿缺血的肌肉插入帶有針灸針的電極，強(qiáng)度O．

5、h，頻率30Hz(低于肌肉收縮強(qiáng)度)，每天2小時(shí)持續(xù)3周。治療3周后用免疫組化方法檢測(cè)電刺激對(duì)于后肢缺血大鼠VEGF及Angio-1表達(dá)的影響，再分別對(duì)缺血對(duì)照組、電刺激組進(jìn)行了新生血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)及毛細(xì)血管密度的測(cè)定。 結(jié)果：后肢缺血大鼠經(jīng)電刺激后VEGF及Anglo-1的表達(dá)均較非電刺激組明顯增加(0．48±0．06vs0．28±O．07，P<0．05)，(0．58±0．03vs0．3±0．05，P<0．05)，鏡下每高倍視野

6、中新生血管內(nèi)皮細(xì)胞及毛細(xì)血管密度計(jì)數(shù)治療組均較非電刺激組增加。(36．7±5．4vs18．5±2．3，P

7、聯(lián)合電刺激對(duì)慢性下肢缺血的治療性血管生成作用研究 目的：評(píng)價(jià)同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合電刺激的治療性血管生成作用及治療下肢慢性缺血的效果。 方法：分離、純化、擴(kuò)增培養(yǎng)雄性wistar大鼠的MSCs，并用Brdu標(biāo)記。40只Wistar大鼠，體重200-250g。經(jīng)左股總動(dòng)脈切斷后制成后肢缺血模型再隨機(jī)分成4組：A缺血對(duì)照組，BMSCs移植組：大鼠股動(dòng)脈切斷后7天接受同種異體MSCs移植治療(5×106MSCs／l0

8、0u1，分6點(diǎn)注入大腿缺血的肌肉)，C電刺激組：大鼠股動(dòng)脈切斷后7天，于大腿缺血的肌肉插入帶有針灸針的電極，強(qiáng)度0．h，頻率30Hz(低于肌肉收縮強(qiáng)度)，每天2小時(shí)持續(xù)3周，DMSCs移植+電刺激組。治療3周后分別對(duì)缺血對(duì)照組、電刺激組、MSCs移植組、MSCs移植+電刺激組進(jìn)行了血管造影、皮溫測(cè)定、新生血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)及毛細(xì)血管密度的測(cè)定。 結(jié)果：血管造影發(fā)現(xiàn)MSCs移植聯(lián)合電刺激組治療后側(cè)枝循環(huán)明顯增加。下肢皮溫測(cè)定發(fā)現(xiàn)缺血的