大蒜新素對(duì)人巨細(xì)胞病毒感染人胚肺成纖維細(xì)胞Caspase-3表達(dá)的影響.pdf

1、目的: 觀察大蒜新素對(duì)人巨細(xì)胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）感染的人胚肺成纖維細(xì)胞（human embryonic lung fibroblasts, HELs）Caspase-3表達(dá)的影響，從細(xì)胞凋亡角度探討大蒜新素抗巨細(xì)胞病毒效應(yīng)的部分作用機(jī)制。 方法: ① HCMV感染細(xì)胞模型制備：用HCMV AD169毒株感染HELs，分別設(shè)感染復(fù)數(shù)（multiply of infecti

2、on，MOI）為2.5和0.25，建立高M(jìn)OI和低MOI感染細(xì)胞模型。 ②大蒜新素處理劑量及實(shí)驗(yàn)分組：根據(jù)HELs細(xì)胞對(duì)大蒜新素最大耐受濃度為9.6 μg/mL，設(shè)藥物大、中、小劑量分別為9 μg/mL，6 μg/mL和3 μg/ml。根據(jù)病毒感染量及大蒜新素處理等因素分為9個(gè)實(shí)驗(yàn)組，即：正常細(xì)胞組；低MOI感染細(xì)胞組；小劑量處理低MOI感染細(xì)胞組；中劑量處理低MOI感染細(xì)胞組；大劑量處理低MOI感染細(xì)胞組；高M(jìn)OI感染細(xì)胞組；

3、小劑量處理高M(jìn)OI感染細(xì)胞組；中劑量處理高M(jìn)OI感染細(xì)胞組和大劑量處理高M(jìn)OI感染細(xì)胞組。 ③在病毒感染和/或藥物處理后72h收集細(xì)胞，采用蛋白印跡法檢測(cè)病毒感染和/或藥物處理后各組細(xì)胞Caspase-3蛋白的表達(dá)。 ④用HMIAS-2000型全自動(dòng)醫(yī)學(xué)彩色圖像分析系統(tǒng)測(cè)定各目的條帶的積分光密度值，以內(nèi)參照條帶進(jìn)行上樣量校正，以校正值A(chǔ)（A=目的條帶的積分光密度/ actin條帶的積分光密度）對(duì)各目的條帶進(jìn)行半定量分析。

4、 結(jié)果: ① HCMV感染對(duì)Caspase-3蛋白表達(dá)的影響：正常細(xì)胞僅見Caspase-3 P32的表達(dá)；細(xì)胞感染HCMV后，無論低MOI還是高M(jìn)OI，Caspase-3 P32的表達(dá)均顯著增加，而且還出現(xiàn)了活性片段P17的條帶，且高M(jìn)OI感染細(xì)胞P17蛋白表達(dá)量明顯高于低MOI感染細(xì)胞。 ②大蒜新素處理低MOI感染組細(xì)胞對(duì)Caspase-3蛋白表達(dá)的影響：大蒜新素處理低MOI感染細(xì)胞，Caspase-3活化片

5、段P17表達(dá)呈上升趨勢(shì)，P17/P32比值也明顯增加。 ③大蒜新素處理高M(jìn)OI感染組細(xì)胞對(duì)Caspase-3蛋白表達(dá)的影響：大蒜新素處理高M(jìn)OI感染細(xì)胞，Caspase-3活化片段P17表達(dá)下調(diào)，P17/P32比值也顯著下降。 結(jié)論: 巨細(xì)胞病毒感染無論高或低MOI，均可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡增多，且高M(jìn)OI誘導(dǎo)凋亡作用更強(qiáng)。 大蒜新素一方面使低MOI感染細(xì)胞凋亡增多；另一方面，卻抑制了高M(jìn)OI感染細(xì)胞的凋亡。推測(cè)