葛根素抑制酒精誘導的人骨髓間充質(zhì)干細胞成脂分化.pdf

1、研究背景；長期大量的酒精攝入可以導致酒精性骨病，包括酒精性骨質(zhì)疏松、酒精性骨壞死等。隨著世界酒精飲品消耗量的增加，酒精性骨病的發(fā)病率逐年增加，對人群健康造成極大危害。具體發(fā)病機制還不清楚。有研究表明，酒精可以通過上調(diào)體外培養(yǎng)小鼠、大鼠和人的骨髓間充質(zhì)干細胞(bonemarrowmesenchymal stem cells；MSCs)的過氧化物酶增殖物活化受體γ2(The peroxisomalproliferator-activated

2、 receptor γ2；PPAR-γ2)的基因表達，促進MSCs成脂分化，抑制其成骨分化，進而導致酒精性骨病的發(fā)生。而近年來研究發(fā)現(xiàn)，異黃酮類物質(zhì)能夠下調(diào)PPAR-γ2的基因表達，抑制地塞米松誘導的MSCs向脂肪細胞分化。 目的；從細胞分子生物學角度研究葛根素是否對酒精導致人骨髓間充質(zhì)干細胞(human bone marrow mesenchymal stem cells；hMSCs)成脂分化具有抑制作用，探討葛根素對酒精性骨

3、病的防治可能性。 方法 1 hMSCs分離與培養(yǎng)骨髓標本取自鄭州大學第一附屬醫(yī)院骨科自愿受試的男性病人。所有受試者均無骨代謝性疾病。每位自愿者抽取骨髓8ml。采用Ficoll淋巴細胞分離液梯度離心法進行分離，獲得原代hMSCs后，接種于含15％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 2實驗分組取傳代細胞，隨機分為3組：空白對照組、模型組(細胞培養(yǎng)基內(nèi)每日加酒精0.09 mol/L)、實驗組(細胞培養(yǎng)基內(nèi)每日加入酒精

4、1次，0.09mol/L；每3日向細胞培養(yǎng)基內(nèi)加入葛根素1次，10×10<'-6>mol/L)。 3 ALP的檢測分組后，分別采用酒精、葛根素進行實驗干預。干預10d，采用全自動生化分析儀檢測細胞內(nèi)ALP活性。 4脂肪細胞染色實驗干預21d，采用油紅“O”法進行脂肪細胞染色，并在光鏡下計數(shù)每cm2細胞爬片上脂肪細胞數(shù)量。 5基因表達的檢測實驗干預7d，采用RT-PCR兩步法檢測各組細胞內(nèi)PPAR-γ2的基因表達情況。

5、 結(jié)果 1 hMSCs的體外培養(yǎng)形態(tài)特點經(jīng)梯度離心法分離獲取hMSCs后，原代細胞接種于培養(yǎng)瓶內(nèi)約4 h開始貼壁，呈圓形的未伸展狀態(tài)； 4 d左右細胞大部分貼壁，向外周伸展，呈飽滿梭形，類似典型的成纖維細胞樣。10d左右細胞數(shù)量顯著增加，多數(shù)聚集形成小集落樣生長，細胞沿一定方向排列。12～16d形成大小不等的集落。細胞多已覆蓋瓶底達80％以上可進行細胞傳代。 2細胞內(nèi)ALP活性分組干預10d，測得細胞內(nèi)．ALP活性模

6、型組中最低為(27.0±10.3 U/100mg蛋白)，顯著低于對照組(39.6±8.7 U/100rag蛋白)和實驗組(40.2±10.1 U/100mg蛋白)(P<0.05)，實驗組稍低于對照組，二者差異無顯著性(P>0.05)。 3脂肪細胞計數(shù)干預21d，模型組脂肪細胞數(shù)最多，達383+37/cm<'2>，而且圓形細胞比例較實驗組多，細胞內(nèi)脂滴大而豐富。實驗組脂肪細胞數(shù)約1984-38個/cm<'2>較模型組內(nèi)脂肪細胞數(shù)顯

7、著減少(P<0.05)，對照組脂肪細胞出現(xiàn)極少僅約7±6個/cm<'2>。 4基因表達干預7d，模型組細胞的PPAR吖2基因表達水平顯著高于對照組(P<0.05)；而實驗組細胞的PPAR-72基因表達水平顯著低于模型組(P<0.05)，稍高于對照組，但二者間差異無顯著性(P>0.05)。 結(jié)論 1酒精具有導致hMSCs成脂分化的作用。 2葛根素能下調(diào)PPAR-γ2基因表達水平。抑制酒精導致的骨髓間充質(zhì)干細