D3T調(diào)控Nrf2-ARE通路對阿爾茲海默病細胞模型的保護作用研究.pdf

1、目的：探討D3T（3H-1,2-dithiole-3-thione）對阿爾茨海默病細胞模型是否具有保護作用及其作用機制。
　　方法：（1）本實驗采用穩(wěn)定表達人淀粉樣前體蛋白家族性Swedish突變體的小鼠神經(jīng)瘤細胞(N2a/APPswe)作為阿爾茲海默病的模型細胞。使用不同濃度的D3T干預(yù)培養(yǎng)的N2a/APPswe細胞24h或48h后通過四甲基偶氮唑（MTT）法檢測細胞活性；流式細胞儀及倒置熒光顯微鏡檢測細胞活性氧（reactiv

2、e oxygen species，ROS）和線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential，MMP)水平；用丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒檢測細胞內(nèi)MDA水平，進一步用ELISA試劑盒檢測Aβ1-40及Aβ1-42的分泌水平，比較各組的差異。（2）使用40μM的D3T處理N2a/APPswe細胞24小時，Real time RT-PCR檢測Nrf2基因及下游基因HO-1，NQO1的

3、mRNA表達水平，并用Western Blot檢測各組間Nrf2蛋白的表達水平，比較各組間的差異。（3）構(gòu)建Nrf2-siRNA序列，運用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默N2a/APPswe細胞的Nrf2基因，再加入40μM的D3T干預(yù)24小時后，檢測轉(zhuǎn)染組及對照組的ROS、MMP、MDA、Aβ分泌水平等指標的變化情況。
　　結(jié)果：（1）10-100μM的D3T對N2a/APPswe細胞的活力無明顯影響。（2）N2a/APPswe細胞與N2a/W

4、t細胞相比，ROS及MDA水平升高，MMP水平降低。D3T干預(yù)N2a/APPswe細胞24h后，可明顯降低N2a/APPswe細胞的ROS及MDA水平，提高MMP水平，并可以減少細胞內(nèi)外Aβ1-40和Aβ1-42的分泌量。（3）D3T干預(yù)N2a/APPswe細胞后，Nrf2及NQO1、HO-1的mRNA表達水平明顯增加，Nrf2蛋白的表達增多，并可促使Nrf2的核轉(zhuǎn)位。（4）Nrf2-siRNA轉(zhuǎn)染細胞后，Nrf2的基因表達明顯抑制，4

5、0μMD3T+Nrf2-siRNA細胞組與40μMD3T+N-siRNA組相比，ROS及MDA水平升高，MMP水平降低，Aβ1-40和Aβ1-42的分泌量增加。
　　結(jié)論：D3T可減少N2a/APPswe細胞Aβ的分泌水平及減輕Aβ引起的細胞氧化損傷，可誘導(dǎo)Nrf2的基因及蛋白表達上調(diào)，說明可激活Nrf2-ARE信號通路。Nrf2siRNA轉(zhuǎn)染細胞后，D3T對沉默Nrf2基因后的N2a/APPswe細胞的保護作用明顯減弱，反向說明