肝癌細胞中腫瘤基因P53-MDM2-P21與HBV關(guān)系的研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學博士學位論文肝癌細胞中腫瘤基因P53MDM2P21與HBV關(guān)系的研究姓名：曲建慧申請學位級別：博士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：朱明華20030401第二軍醫(yī)大學博士學位論文中文摘要在不依賴于P53的途徑對P21的活化表達具有促進作用；而在Hep3B細胞，由于P53全基因缺失，細胞中無P53蛋白表達，P21蛋白以及P21一LUC報告基因處于相對較低水平：HCC9204細胞中存在低水平的P53與P21蛋白表達；與HepG2

2、細胞相比，HepG2215較HepG2具有較高的P53、P21蛋白表達，而且報告基因PGl3一CAT、P21一LUC在HepG2215細胞中表達均高于HepG2細胞，考慮這可能與細胞中HBV的復制有關(guān)。HBV在細胞內(nèi)的復制可能通過P53依賴或非依賴的途徑對P21具有促進作用。從MDM2的表達情況來看，發(fā)現(xiàn)肋M2與P53的表達具有相反的趨勢：在MDM2表達偏低的細胞，P53表達偏高，如PLc／PRF／5，HepG2(HepG2215)細胞

3、；而在MI)M2高表達的HCC9204、Hep3B細胞，P53表達偏低或無表達。說明MDM2對于野生型或變異型P53可能都具有降解作用。選用HepG2、tepG2215、Hep3B、PLc／PRF／5四種肝癌細胞系。分別給予一定劑量的紫外線照射，Westernblot方法檢測P53蛋白表達的改變，用3H摻入法通過檢測細胞的程序外DNA合成，觀察各細胞DNA切除損傷修復能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PLC／PRF／5細胞在紫外線照射前后P53蛋白表達沒

4、有明顯改變；Hep3B細胞照射前后P53蛋白均無表達：在HepG2、HepG2215細胞，發(fā)現(xiàn)紫外線照射后的P53蛋白表達明顯增強。HepG2、HepG2215細胞對紫外線誘導的DNA損傷修復能力明顯高于PLC／PRF／5、Hep3B細胞。說明在具有P53活性表達的細胞，紫外線照射可以通過活化細胞內(nèi)P53，促進細胞的DNA損傷修復，幫助細胞度過損傷。HepG2細胞的DNA切除損傷修復能力相對強予HepG2215細胞，這可能與HepG22

5、15細胞中HBV的復制有關(guān)，提示HBV通過干擾損傷DNA修復，而與肝癌的發(fā)生有關(guān)。二、HBV與P53作用關(guān)系初步研究在上面實驗中，發(fā)現(xiàn)HepG2215細胞中P53活性以及P53／P21表達較HepG2明顯增高，本實驗進一步比較了HepG2與HepG2215細胞生物學活性以及成瘤性，并在7721肝癌細胞系中，通過細胞內(nèi)轉(zhuǎn)染HBV與P53質(zhì)粒，觀察了HBV對P53活性、蛋白表達以及對P53下游基因P21基因啟動子的影響，以及P53對HBV病