Sulfated lactosyl ceramide致integrin alpha v subunit升高的機(jī)制研究.pdf

1、目的:Lactosyl ceramide是糖鞘脂(G1ycosphingolipids)的一類，Lactosyl ceramide屬于神經(jīng)鞘脂(Sphingolipids)，是一類具有一個極性的頭部，兩個非極性的尾部的跨膜糖脂，主要存在于神經(jīng)系統(tǒng)，在非神經(jīng)系統(tǒng)主要存在于胃、小腸、腦、腎和肺?；酋；?Sulfated)的lactosyl ceramide(SM3)在腫瘤轉(zhuǎn)移方面的功能于上世紀(jì)90年代由Hiroshi等進(jìn)行初步的研究，但其在

2、腫瘤細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)方面的很多細(xì)節(jié)問題研究幾乎是空白。本實(shí)驗(yàn)室已完成的研究提示磺?；墓δ苤豢赡苁峭ㄟ^某種信號途徑提高如integrin alpha vsubunit。本課題就是要探討integrin alpha v subunit是否因?yàn)榛酋；撸浯翁接懫渖叩目赡軝C(jī)制，以便進(jìn)一步完善磺?；墓δ苎芯?。 方法:為觀察磺?；瘜Ω伟┘?xì)胞integrin alpha v subunit表達(dá)的影響，以不同濃度的sulfated l

3、actosyl ceramide處理細(xì)胞后，觀察12小時、24小時和48小時內(nèi)不同時間點(diǎn)integrin alpha v subunit的表達(dá)，加入不同濃度外源sulfated lactosyl ceramide衡量其對integrin alpha v subunit的影響，通過RT-PCR和Western blot兩種實(shí)驗(yàn)方法觀察mRNA水平和蛋白水平的差異大??；為進(jìn)一步驗(yàn)證sulfated lactosyl ceramide的特異的

4、磺酰化而非其它因素導(dǎo)致 integrin alpha v subunit表達(dá)差異，我們用了兩個外源性結(jié)構(gòu)電荷相似化合物為對照以排除可能產(chǎn)生的偏誤，其次為更加明確磺?；淖饔?，我們構(gòu)建了CST正義質(zhì)粒并用構(gòu)建CST RNAi質(zhì)粒，進(jìn)行細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，也以RT-PCR和Western blot的方法測定可能的integrin alpha v subunit表達(dá)差異。在此前提下，我們又以同樣的方法測定了影響integrin alpha v su

5、bunit 最有可能的轉(zhuǎn)錄因子Sp1。 結(jié)果:第一步的RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果表明sulfated lactosyl ceramide對于肝癌細(xì)胞integrin alpha v subunit表達(dá)有明顯的提高，并以時間與劑量依賴的方式調(diào)節(jié)integrin alpha v subunit的表達(dá)，其中以24小時2mmol為最長有效時間和最大濃度；sulfated lactosylceramide的integr

6、in alpha v subunit的表達(dá)與其四個結(jié)構(gòu)電荷相似化合物參照在mRNA水平和蛋白水平上有差異，sulfated lactosyl ceramide的立體構(gòu)象或電荷數(shù)與integrin alpha v subunit表達(dá)沒有明顯的關(guān)系，內(nèi)源性的sulfated lactosyl ceramide也可以提高integrin alpha v subunit表達(dá) (RT-PCR與Western blot)；如上所述，轉(zhuǎn)錄因子Sp1與

7、 integrin alpha v subunit同向變化；除此之外，所有的瞬時轉(zhuǎn)染都支持同樣的結(jié)果。 結(jié)論:sulfated lactosyl ceramide對于肝癌細(xì)胞integrin alpha vsubunit表達(dá)有明顯的提高；轉(zhuǎn)錄因子Sp1與integrin alpha v subunit同向變化，sulfated lactosyl ceramide的integrin alpha v subunit差異表達(dá)的根本原因