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1、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞是肺內(nèi)的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞,它作為肺泡干細(xì)胞能增殖分化為肺泡Ⅰ型上皮細(xì)胞,在肺損傷后肺泡上皮的修復(fù)與更新過程中有重要意義.目的:該實(shí)驗(yàn)的目的是用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)復(fù)制急性肺損傷時(shí)的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞體外損傷模型,在獨(dú)立環(huán)境下觀察肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞在增殖和分泌功能方面的損傷情況.同時(shí)應(yīng)用已在臨床證明能輔助治療和預(yù)防感染性急性肺損傷的龍芩草噴霧劑進(jìn)行干預(yù),探討此復(fù)方的作用機(jī)理.方法:第一部分:按照D
2、obbs等提供的方法并適當(dāng)改進(jìn)分離大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,用IgG免疫粘附的方法純化分離的細(xì)胞,細(xì)胞鑒定采取鞣酸染色和AKP方法.第二部分:應(yīng)用體外培養(yǎng)的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,觀察脂多糖對(duì)其分泌功能及SP-A、SP-B及AQP1mRNA表達(dá)的影響,同時(shí)進(jìn)行龍芩草噴霧劑干預(yù)觀察藥物的作用.通過酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-8水平變化,運(yùn)用FQ-PCR方法觀察肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞中SP-A、SP-B和AQP1mRNA表達(dá)的改
3、變.結(jié)論:1.大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的分離、純化和鑒定:適當(dāng)?shù)南笣舛?、時(shí)間可提高分離細(xì)胞的活力,細(xì)胞分離后用IgG免疫粘附方法純化可使純度提高15%,鞣酸染色和AKP鑒定可見Ⅱ型細(xì)胞上的特征性板層小體.2.脂多糖單獨(dú)作用于體外培養(yǎng)的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞可直接損傷細(xì)胞,表現(xiàn)為抑制其增殖;刺激其分泌炎癥因子TNF-α及IL-8增加;使SP-A、SP-B和AQP-1mRNA的表達(dá)明顯下降,抑制肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞分泌表面活性蛋白和水通道蛋白的功能.
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