天然產(chǎn)物抗氧化組分的毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光法篩選與評價(jià).pdf

1、隨著自由基生物學(xué)的發(fā)展和分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，有關(guān)人體病變的自由基理論的研究在過去10年間取得了令人信服的進(jìn)展，而具有清除自由基能力的抗氧化劑的研究也日益成為熱點(diǎn)。由于合成抗氧化劑多具有毒副作用，含有抗氧化組分的天然產(chǎn)物以其低毒、高效、價(jià)廉的優(yōu)勢逐漸受到研究者的重視。但天然產(chǎn)物為多組分復(fù)雜基體，對其所含組分展開逐一篩選和評價(jià)無法通過傳統(tǒng)的抗氧化劑研究方法得以實(shí)現(xiàn)。毛細(xì)管電泳（CE）-化學(xué)發(fā)光（CL）聯(lián)用模式是近年來提出的針對復(fù)雜體系各組

2、分進(jìn)行抗氧化活性在線評價(jià)的新方法，其原理是將自由基氧化發(fā)光試劑的反應(yīng)體系與CE技術(shù)耦合，通過抗氧化劑對自由基的清除造成發(fā)光被抑制從而實(shí)現(xiàn)檢測。然而CE-CL方法目前僅被用于少量抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)化合物混合假體系的評價(jià)，并未對天然產(chǎn)物真實(shí)體系展開廣泛探索。本研究針對天然產(chǎn)物抗氧化組分缺乏系統(tǒng)研究的現(xiàn)狀，以CE-CL聯(lián)用方法為手段，不僅對抗氧化組分進(jìn)行在線篩選與活性表征，還建立了抗氧化生物指紋圖譜用于天然產(chǎn)物的質(zhì)量控制，更對抗氧化組分的血漿蛋白結(jié)

3、合率、脂水分配系數(shù)等藥效藥動學(xué)參數(shù)進(jìn)行了探究。
　　 本論文由兩部分構(gòu)成：
　　 第一部分（第2章），構(gòu)建了CE-CL聯(lián)用儀器，以luminol為化學(xué)發(fā)光試劑，對NaClO-H2O2、Cu2+-H2O2兩個自由基體系用作CE柱后檢測的最佳CL條件進(jìn)行了優(yōu)化，以苦參堿和氧化苦參堿為研究對象，對在線定量評價(jià)抗氧化劑的方法進(jìn)行了探討，并結(jié)合熒光光譜法，驗(yàn)證了CE-CL系統(tǒng)和采用的發(fā)光體系在抗氧化劑篩選及活性評價(jià)方面的可行性及可

4、靠性。
　　 第二部分（第3、4、5章），在第2章獲得的兩個自由基體系最佳發(fā)光條件下，對含有生物堿類、黃酮類、醌類、酚酸類化合物的天然產(chǎn)物中的抗氧組分進(jìn)行了研究。
　　 第3章，對麻黃、苦參、黃連、黃柏、貝母5種富含生物堿類化合物的天然產(chǎn)物進(jìn)行了抗氧化組分的在線篩選，以相對自由基清除率為指標(biāo)，對抗氧化組分的分布信息進(jìn)行了探討，獲得這5種天然產(chǎn)物中，苦參含有的抗氧化組分種類最多并且活性最強(qiáng)，其余依次是黃柏、麻黃、黃連和貝母

5、。并進(jìn)一步通過平衡透析法，對5種天然產(chǎn)物提取物與血漿蛋白的結(jié)合作用進(jìn)行了研究，獲得了麻黃提取物中麻黃堿與血漿蛋白的結(jié)合率。
　　 第4章，以富含多種黃酮類化合物的中藥黃芪為對象，對內(nèi)蒙古、安徽、東北、福建、山西、廣西、浙江、河南8個產(chǎn)地黃芪中抗氧化組分的種類及活性的相似度進(jìn)行了比較，通過構(gòu)建黃芪的抗氧化生物指紋圖譜，達(dá)到了以藥效為指標(biāo)對中藥進(jìn)行質(zhì)量控制的目的。此外，通過對黃芪注射液抗氧化成分分析，對中藥材制劑加工過程的質(zhì)量控制進(jìn)

6、行了初步探索。
　　 第5章，以含有醌類及酚酸類化合物的中藥丹參為研究對象，采用MEEKC-CL的方法，實(shí)現(xiàn)了丹參提取物中脂溶性、水溶性抗氧化成分的同時(shí)分析，并對部分組分的脂水分配系數(shù)進(jìn)行了測算，獲得丹參主要有效成分丹參酮ⅡA和丹酚酸B的log Pow值分別為2.013和1.630。
　　 研究結(jié)果表明，CE-CL聯(lián)用模式不僅可用于多組分復(fù)雜體系中抗氧化劑的在線篩選與評價(jià)，基于此模式還可展開組分的藥效學(xué)、藥動學(xué)參數(shù)測算，