aPKC-ι作為人類肝癌治療新靶點的實驗研究.pdf

1、【目的】aPKC-ι作為一種極化調(diào)節(jié)蛋白，在肝細胞肝癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉移中起著重要作用。本研究為了證實aPKC-ι在信號通路中可以與下游適配體PAR6相互作用，及硫代蘋果酸金鈉（Aurothiomalate，ATM）可對二者結合起劑量依賴性抑制作用。
　　 【方法】本研究通過化學合成aPKC-ι基因（1-339bp）和PAR6基因全長，分別亞克隆于原核表達載體，構建pET-15b/aPKC-ι和pGEX-4t-3/PAR6

2、重組質(zhì)粒。質(zhì)粒擴增后，分別轉化E coli.BL21(DE3)，經(jīng)IPTG誘導蛋白表達后，行GST pull down驗證蛋白aPKC-ι與PAR6之間的相互作用，及ATM對其結合的抑制作用。
　　 【結果】成功構建了重組原核質(zhì)粒蛋白表達系統(tǒng)。GST pull down結果分析證實Par6與aPKC-ι的PB1結構域存在直接的結合關系。硫代蘋果酸金鈉（ATM）可以抑制二者直接結合，且隨抑制劑ATM濃度的增大，其二者結合愈弱。經(jīng)W

3、estern Blot的半定量分析，將IOD值標準化，確定不加入ATM時二者的結合率為100％，則加入10 μM ATM時二者的結合率為63.8％，加入50 μM ATM時二者的結合率為32.7％。
　　 【結論】在aPKC-ι信號通路中，aPKC-ι與Par6直接結合為極化復合物，與肝癌的腫瘤生長及侵襲轉移密切相關。金化合物ATM可以抑制二者結合，中斷信號通路。aPKC-ι可能成為肝細胞肝癌治療新靶點，為肝癌治療提供新途徑、新