cDNA芯片在乳腺癌個(gè)體化治療中作用的研究.pdf

1、乳腺癌輔助化療能夠降低乳腺癌患者的復(fù)發(fā)和死亡，但是絕對(duì)死亡率的減少僅為10％-12％。目前乳腺癌的治療，臨床醫(yī)師均依據(jù)循證醫(yī)學(xué)指南經(jīng)驗(yàn)用藥，對(duì)于病理類型和分期以及個(gè)別乳腺癌相關(guān)基因(如：ER、PR、HER-2)相同的乳腺癌患者，均采用相同的化療方案。但是乳腺癌是一種多種分子改變累積的多基因疾病，表現(xiàn)為病人的臨床異質(zhì)性。因此，接受同樣方案治療卻有著完全不同的預(yù)后的乳腺癌患者比比皆是。這就說明了我們目前的主要依靠細(xì)胞形態(tài)學(xué)進(jìn)行乳腺癌分類的方

2、法不足夠準(zhǔn)確，迫切需要找到一種能夠準(zhǔn)確分類，且這種分類可以準(zhǔn)確指導(dǎo)化療方案的制定的方法。 基因芯片的高通量、微型化、自動(dòng)化的特點(diǎn)使其可以同時(shí)檢測(cè)成千上萬個(gè)基因。我們可以利用它來檢測(cè)乳腺癌組織基因表達(dá)圖譜，發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)基因，基因表達(dá)圖譜的差異為乳腺癌的臨床異質(zhì)性提供了分子水平上的證據(jù)，并可以此對(duì)乳腺癌重新分類，且這種分類和患者接受某種化療后的預(yù)后相關(guān)，從而發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)具體患者對(duì)于具體化療方案敏感性的基因表達(dá)模式。 本研究采用新

3、輔助化療為研究背景。行新輔助化療不僅可以在治療前獲取乳腺癌原發(fā)腫瘤樣本分析其基因表達(dá)圖譜，還可以在化療周期間獲取乳腺癌標(biāo)本以檢測(cè)早期基因表達(dá)變化，而且，可以通過直接監(jiān)測(cè)腫瘤大小變化了解化療療效。新輔助化療后的臨床緩解和病理緩解狀況均和患者的預(yù)后相關(guān)。接受新輔助化療后那些臨床上腫瘤消退明顯的患者預(yù)后要優(yōu)于那些消退不明顯或明顯耐藥的患者，而達(dá)到病理完全緩解(pCR)的患者，其無病生存率(DFS)、無遠(yuǎn)處疾病生存率(DDFS)和總生存率(OS

4、)都高于其他患者，且差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)合臨床腫瘤大小變化及術(shù)后病理緩解情況評(píng)估化療方案療效，探索基因表達(dá)模式同化療療效間的相關(guān)性，從而發(fā)現(xiàn)能夠預(yù)測(cè)療效的基因表達(dá)模式。總之，新輔助化療為我們發(fā)現(xiàn)這一預(yù)測(cè)因子提供了理想的平臺(tái)。 本研究就運(yùn)用了基因芯片技術(shù)和新輔助化療為平臺(tái)或背景進(jìn)行研究，期望本研究能為乳腺癌的個(gè)體化治療的相關(guān)研究提供一些參考。 目的： 利用自制cDNA芯片檢測(cè)乳腺癌新輔助化療前后腫瘤基因表達(dá)圖譜及

5、其變化，以發(fā)現(xiàn)能夠預(yù)測(cè)化療療效的基因表達(dá)圖譜，指導(dǎo)臨床醫(yī)師制定更合理的乳腺癌化療方案，使患者可以獲得最有效、最經(jīng)濟(jì)的治療。 方法： 所有病人均在接受治療前通過組織學(xué)證實(shí)為乳腺癌患者，在征得病人同意后對(duì)病人行三周期新輔助化療并在化療開始前及化療第二周期前和術(shù)后取腫瘤組織凍存?zhèn)湫谢驁D譜分析。 1.搖菌、提取質(zhì)粒、PCR擴(kuò)增，獲得腫瘤相關(guān)基因PCR產(chǎn)物，經(jīng)純化后點(diǎn)至玻片上，制備成包含5952個(gè)點(diǎn)陣的腫瘤相關(guān)基因cDN

6、A芯片。 2.提取凍存乳腺癌組織與正常乳腺組織總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄并標(biāo)記為cDNA探針，與cDNA芯片雜交，經(jīng)Scanarray4000芯片掃描儀掃描圖象，應(yīng)用Quantarray3.0軟件分析，得到基因表達(dá)的數(shù)據(jù)資料。應(yīng)用半定量RT-PCR方法對(duì)cDNA芯片檢測(cè)的某些差異表達(dá)基因的表達(dá)狀況進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)果： 1.經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，自行制備的腫瘤相關(guān)基因cDNA芯片，掃描圖象信號(hào)清晰，背景信噪低，重復(fù)性好，結(jié)果理想。