北歐藍(lán)莓提取物對體外培養(yǎng)人角膜緣上皮細(xì)胞作用的初步研究.pdf

1、目的： 北歐藍(lán)莓作為一種有益于人視力的食物或者保健品，在全世界已有很長時間廣泛應(yīng)用。但是，目前無論是臨床試驗還是基礎(chǔ)研究，在北歐藍(lán)莓在應(yīng)用于眼表疾病方面仍缺乏系統(tǒng)的科學(xué)依據(jù)。本文研究不同濃度北歐藍(lán)莓提取物(簡稱北歐藍(lán)莓素)對體外培養(yǎng)的人角膜緣上皮細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及分泌功能的影響，從而為進(jìn)一步揭示北歐藍(lán)莓素在眼表疾病如干眼癥治療及恢復(fù)中的潛在應(yīng)用價值提供實驗依據(jù)。 方法： 1、北歐藍(lán)莓提取物的溶解、除菌與稀釋。

2、 2、體外培養(yǎng)人角膜緣上皮細(xì)胞(人角膜緣上皮細(xì)胞系SDHCEC1由中山眼科中心王智崇教授惠贈)，選擇P22-25代細(xì)胞用于以下實驗。將不同濃度(100，10，1，0.1，0.01，0.001μM)北歐藍(lán)莓素加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，于藥物作用后24小時、48小時分別檢測以下指標(biāo)： (1)通過3-(4，5-二甲基噻唑—2)—2，5-=苯基四氮唑溴鹽比色法(MTT法)檢測對細(xì)胞增殖的影響； (2)流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞周期及處于不

3、同細(xì)胞周期細(xì)胞亞群的比例； (3)酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)(ELISA法)檢測細(xì)胞分泌的透明質(zhì)酸(HA)的變化； (4)酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)(ELISA法)檢測細(xì)胞分泌的氨基葡聚糖(GAGs)的變化。 結(jié)果： 1、北歐藍(lán)莓提取物在10mg/mL濃度下完全溶解于PBS，在各濃度下(1000，100，10，1，0.1，0.0μM)基本呈無色透明狀態(tài)； 2、體外傳代培養(yǎng)人角膜緣上皮細(xì)胞，細(xì)胞生長狀態(tài)良好，光

4、學(xué)倒置顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)與文獻(xiàn)報道一致。 3、MTT法檢測：10μM濃度的北歐藍(lán)莓素培養(yǎng)24小時后，HCEC增殖程度明顯，與對照組相比，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；1μM，10μM，100μM北歐藍(lán)莓素培養(yǎng)48小時后，HCEC增殖程度明顯，與對照組相比，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05； 4、北歐藍(lán)莓素培養(yǎng)48小時后，各濃度組流式細(xì)胞儀均未檢測出凋亡細(xì)胞，且發(fā)現(xiàn)在100μM北歐藍(lán)莓素作用組，處于S期、G2/M期的細(xì)胞

5、比例明顯增加，G0/G1期細(xì)胞比例減少； 5、北歐藍(lán)莓素培養(yǎng)48小時后，各濃度組HCEC細(xì)胞中，HA分泌量與對照組相比增加不明顯，差別無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05； 6、0.1μM、100μM北歐藍(lán)莓素培養(yǎng)48小時后，HCEC分泌GAGs明顯增加，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。 結(jié)論：北歐藍(lán)莓素對體外培養(yǎng)的人角膜緣上皮細(xì)胞無明顯細(xì)胞毒性及促凋亡作用；一定濃度的北歐藍(lán)莓素作用下，可以促進(jìn)體外培養(yǎng)的人角膜緣上皮細(xì)胞