PPARγ拮抗劑發(fā)現(xiàn)及15d-PGJ-,2-在PPARγ-TGFβ-Smad2通路中的調(diào)控作用研究.pdf

1、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)是核受體家族中的一個(gè)非常重要的成員，它們?cè)谡{(diào)節(jié)脂類和糖代謝平衡方面具有重要的功能?，F(xiàn)在PPARγ已經(jīng)作為一個(gè)重要的藥物篩選靶標(biāo)用于治療糖尿病、炎癥、壞脂血、高血壓和癌癥等。研究發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于PPARγ的激動(dòng)劑，PPARγ的拮抗劑和半激動(dòng)劑在治療糖尿病的過(guò)程中，除了能有效的保持胰島素敏感性外，還表現(xiàn)出更小的副作用。因此，PPARγ拮抗劑具有更佳的成藥價(jià)值。本文通過(guò)運(yùn)用基于表面等離子共振(SPR)技術(shù)

2、的Biacore體外篩選系統(tǒng)，我們發(fā)現(xiàn)二肽H-Trp-Glu-OH(G3335)與PPARγ具有很高的選擇性結(jié)合活性，并且G3335可以抑制羅格列酮誘導(dǎo)增強(qiáng)的PPARγ/RXR相互作用。在此基礎(chǔ)上，運(yùn)用酵母雙雜交和哺乳動(dòng)物反式激活實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步證實(shí)了G3335具有潛在的PPARγ拮抗活性。此外，同源模建和分子對(duì)接發(fā)現(xiàn)PPARγ的Cys285殘基在G3335/PPARγ相互作用中具有非常重要的貢獻(xiàn)，同時(shí)點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn)。因此，通過(guò)發(fā)

3、現(xiàn)PPARγ拮抗劑G3335，我們建立了一套非常有效的PPARγ拮抗劑篩選平臺(tái)，而G3335則可能成為一個(gè)先導(dǎo)化合物用于治療糖尿病的研究。此章數(shù)據(jù)發(fā)表于ChemBioChem(2006)。
　　 15d-PGJ2是PPARγ的一個(gè)天然激動(dòng)劑，它能夠促進(jìn)脂肪細(xì)胞生成，并且在調(diào)節(jié)炎癥發(fā)生過(guò)程中具有重要作用。除此之外，有研究報(bào)道15d-PGJ2還能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞因子Smad2的活性。然而到目前為止還沒(méi)有報(bào)道定量的分析這種效應(yīng)，并且在15d

4、-PGJ2調(diào)控Smad2的活性是否通過(guò)PPARγ的問(wèn)題上，還存在很大的爭(zhēng)議。在此，我們運(yùn)用IN Cell Analyzer1000儀器和核轉(zhuǎn)運(yùn)分析模塊(NucleusTrafficking Analysis Module)軟件，定量的研究了15d-PGJ2調(diào)控TGFβ誘導(dǎo)的Smad2在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)位作用。結(jié)果表明：(1)、TGFβ能夠有效的誘導(dǎo)Smad2從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)(EC50=8.83 pM)；(2)、15d-PGJ2能夠通過(guò)P

5、PARγ有效的抑制TGFβ誘導(dǎo)的Smad2在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)位作用；(3)、在PPARγ/TGFβ/Smad2信號(hào)通路中，15d-PGJ2與PPARγ的另一個(gè)激動(dòng)劑——羅格列酮對(duì)此通路具有完全相反的調(diào)控作用，這表明它們可能以不同的方式激活PPARγ。因此，本文除了定量的研究了15d-PGJ2和TGFβ在PPARγ/TGFβ/Smad2信號(hào)通路中的調(diào)控作用外，還為研究PPARγ的激動(dòng)劑在復(fù)雜的藥理學(xué)通路中的調(diào)控作用提供了一個(gè)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。此章結(jié)果發(fā)