膽汁酸受體FXR對肝內(nèi)雌激素代謝調(diào)控以及與肝癌中Wnt-β-Catenin信號通路關(guān)系的研究.pdf

1、膽汁是消化系統(tǒng)的內(nèi)分泌物，主要成分有97％的水，其余3％包括膽鹽，膽固醇，少量脂肪，膽紅素以及卵磷脂等。膽汁對體內(nèi)多種營養(yǎng)的吸收和利用有著重要作用，例如對脂肪的乳化，脂溶性維生素的吸收，鈣的吸收，以及調(diào)節(jié)膽囊和胰腺的功能。膽汁酸作為膽汁的重要組成還有調(diào)節(jié)腸道菌群作用。膽汁淤積癥是常見的肝臟代謝類疾病之一，由膽汁生成和流動性障礙引起，或者兩者同時存在，因此又叫膽汁淤積綜合癥。膽汁淤積癥主要臨床表現(xiàn)為黃疸和皮膚瘙癢，重者可導(dǎo)致肝功能衰竭。根

2、據(jù)不同的膽汁淤積病因，臨床上采取不同的治療方式，如對于腫瘤、膽道狹窄和膽結(jié)石導(dǎo)致的梗阻性膽汁淤積，在確診堵塞部分之后主要通過手術(shù)介入治療，然后再輔助一些藥物如熊去氧膽酸等。出現(xiàn)嚴重的肝功能衰竭者可能需要做肝移植手術(shù)。
　　據(jù)統(tǒng)計中國0.8％～12.0％的妊娠期女性伴有膽汁淤積癥，臨床上主要表現(xiàn)為皮膚瘙癢和高水平的膽汁酸即黃疸，嚴重時會導(dǎo)致嬰兒死亡，分娩后癥狀消失但是再次懷孕或者過量口服雌激素避孕藥又會復(fù)發(fā)。研究表明，妊娠期女性雌激

3、素水平維持在非常高的水平，過多合成的雌激素堆積在肝內(nèi)，導(dǎo)致Na+-K+-ATP酶活性下降，肝細胞膜中膽固醇含量升高，膜通透性下降，膽汁代謝與排泄出現(xiàn)障礙。雌激素作為類固醇激素對人體生理代謝活動是非常重要的。有研究發(fā)現(xiàn)，持續(xù)地給C57小鼠高劑量的雌激素引起膽汁水平升高。肝內(nèi)高水平的雌激素激活雌激素受體ER，ER能夠與膽汁酸受體FXR相互作用并抑制FXR的功能。但是又發(fā)現(xiàn)膽汁酸激活的FXR促進雌激素受體ER的活性，因為膽汁酸CDCA與雌激素

4、E2協(xié)同刺激乳腺癌細胞的增殖。
　　本課題主要研究膽汁酸對雌激素的調(diào)控。首先，測定了膽汁淤積癥病人的血液中雌激素與總膽汁的含量。然后隨訪病人手術(shù)介入治療后，發(fā)現(xiàn)治療前血液中的雌激素與膽汁酸含量是呈現(xiàn)一種正相關(guān)性，手術(shù)后膽汁酸水平降低了，而此時雌激素也是恢復(fù)正常水平。發(fā)現(xiàn)雌激素與膽汁酸含量呈正相關(guān)與肝損傷無關(guān)。
　　為了進一步研究此現(xiàn)象的分子機制，使用了小鼠膽管結(jié)扎模型研究膽汁酸與雌激素之間的關(guān)系。膽管結(jié)扎模型是一種急性膽管堵

5、塞模型，是使用非常普遍的膽汁淤積模型之一。把小鼠分成兩組假手術(shù)（Sham）和結(jié)扎組(BDL)，為了防止膽汁淤積導(dǎo)致肝損傷的干擾，在小鼠膽管結(jié)扎3天后眼球采血，檢測膽汁酸與雌激素的水平變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在BDL小鼠也發(fā)現(xiàn)類似人體膽汁淤積癥病人的現(xiàn)象，膽汁酸升高，雌激素也偏高，而在假手術(shù)組中兩者水平差別不明顯。為了進一步驗證這個結(jié)論，使用另一個膽汁酸淤積模型-膽汁酸受體FXR敲除小鼠(FXR-/-)。之前研究表明FXR-/-小鼠隨著周齡增加肝內(nèi)

6、膽汁淤積加重。通過對比8周大的FXR-/-與WT小鼠（排除生理周期和性別對雌激素水平的影響，所有的實驗小鼠都選擇雌性）血清中膽汁酸與雌激素水平，讓人意外地發(fā)現(xiàn)在FXR-/-小鼠雖然膽汁酸淤積，但是雌激素水平?jīng)]有明顯地升高反而降低了約20％。深入研究FXR對肝內(nèi)雌激素合成代謝關(guān)鍵基因調(diào)控。通過比較FXR-/-與WT小鼠肝臟中雌激素代謝關(guān)鍵基因的表達譜，篩查了十多個雌激素代謝基因，結(jié)果顯示雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶SULT1E1在兩者中表達差異極其顯

7、著。通過對SULT1E1基因的啟動子分析，發(fā)現(xiàn)FXR自身并沒有直接結(jié)合在SULT1E1基因啟動子區(qū)域，而是通過干擾HNF4α的轉(zhuǎn)錄活性和DNA結(jié)合能力抑制SULT1E1基因表達。
　　FXR主要調(diào)節(jié)體內(nèi)膽汁酸代謝、膽固醇代謝和糖脂代謝，具有典型的核受體轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)。本課題的創(chuàng)新點在于發(fā)現(xiàn)膽汁酸也可以上調(diào)雌激素水平，膽汁酸激活的FXR抑制SULT1E1基因的表達，從而上調(diào)雌激素水平。本基礎(chǔ)研究為解釋疾病的發(fā)病機理提供了新的思路。鑒于