霍亂弧菌檢測芯片的研制.pdf

1、霍亂弧菌是霍亂的病原菌.霍亂可以引起爆發(fā)、流行、大流行,嚴重危害人民健康,甚至社會安定.霍亂在南亞地區(qū)流行了至少上千年.自1817年以來,霍亂發(fā)生過七次世界大流行.歷史上霍亂的七次大流行的病原菌,前6次是古典型霍亂弧菌,第七次是埃爾托型霍亂弧菌.1992年10月,一種被稱為O 139型的新型霍亂弧菌首次襲擊印度大陸,引發(fā)了典型的霍亂爆發(fā).一些專家指出,O 139型霍亂弧菌很可能會引起第八次世界性霍亂大流行.霍亂弧菌快速準確的檢測,對于自

2、然流行的監(jiān)測與預防,具有重要意義.20世紀90年代新出現(xiàn)和發(fā)展起來的基因芯片技術,是近年來在生命科學領域內(nèi)興起的一項高新技術.而用基因芯片檢測霍亂弧菌的方法,迄今為止,世界范圍內(nèi)均未見公開報道.為了成功地研制一塊應用型的霍亂弧菌基因檢測芯片,以λ噬菌體全基因組DNA模擬病原體霍亂弧菌的一個靶區(qū)域,試驗性地對霍亂弧菌檢測芯片探針的制備方法、樣品的標記方法和芯片的雜交條件等進行了探索和優(yōu)化.通過多種方法的試驗和篩選,找到了一個簡便有效的電泳

3、條帶的大規(guī)模批量回收轉(zhuǎn)移方法,即牙簽插膠法;在芯片探針制備的探索中,摸索出了一個簡化的大規(guī)模地制備探針的方法,即GIN-PCR法.通過以λ噬菌體為試驗對象,探索出了一個實用、有效的芯片制備技術和一個改進的芯片檢測方法.利用這些方法,成功地研制了一塊霍亂弧菌檢測芯片.經(jīng)過試驗性樣品雜交檢測,結果證實,研制的霍亂弧菌Tarp檢測芯片可成功地用于霍亂弧菌樣品的檢測,并確定被檢測樣品的帶毒情況.在這個課題的研究實驗過程中,還創(chuàng)新了具有推廣價值的