超聲激活血卟啉聲動力作用抑制雞胚絨毛尿囊膜新生血管形成的實驗研究.pdf

1、第一部分超聲激活血卟啉聲動力作用抑制絨毛尿囊膜新生血管形成的參數(shù)優(yōu)化 目的：觀察超聲激活血卟啉聲動力作用對雞胚絨毛尿囊膜新生血管形成的影響并優(yōu)化其實驗參數(shù)。 方法：采用所選發(fā)育天數(shù)的雞胚進行超聲激活血卟啉聲動力作用抑制絨毛尿囊膜新生血管形成的實驗，將CAM標本用數(shù)碼相機拍照后，通過血管生成計數(shù)法檢測空白對照組、單純超聲組、單純血卟啉組及血卟啉SDT組對雞胚絨毛尿囊膜(CAM)新生血管的影響，并以此確定超聲參數(shù)和血卟啉劑量

2、，觀察超聲激活血卟啉聲動力作用抑制雞胚CAM新生血管生成的最佳參數(shù)。加入血卟啉時應嚴格暗室避光操作。 結果：血管計數(shù)法顯示：當固定頻率為1MHz，聲強為1.5W，輻照時間為0s、30s、60s、90s時，各實驗組CAM血管數(shù)量分別為60.08±18.48、62.27±26.02、43.66±9.38、30.19±8.75，可見單純超聲對CAM血管生成有抑制作用，且抑制作用隨輻照時間增加而增強；當固定頻率為lMHZ，輻照時間為90

3、S，聲強各組分別為0w/cm2、0.5w/cm2、1.0w/cm2、1.5w/cm2，各實驗組CAM血管數(shù)量分別為60.19±20.30、55.61±21.79、56.20±22.46、37.98±6.88，1.5w組與空白對照組比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，可見當單純超聲輻照聲強為1.5w/cm2時，對CAM血管生成有抑制作用；當單純血卟啉濃度為0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml時，各實驗組CAM

4、血管數(shù)量與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.01)。說明單純血卟啉對CAM新生血管的生成無影響；當固定頻率為1MHZ，輻照時間為90s，聲強為1.5w/cm2，各組血卟啉濃度為0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml時，各實驗組CAM血管數(shù)量分別為35.69±9.45、25.44±8.93、17.07±6.31、17.62±5.11。各實驗組與對照組相比較差異有統(tǒng)計學意義，(P＜0.01)，其中50μg/ml與

5、75μg/ml組相比較差異無統(tǒng)計學意義， (P＞0.01)。說明血卟啉SDT對CAM新生血管的生成有明顯影響，當血卟啉濃度達50μg/ml時其抑制效應最大。 結論：超聲激活血卟啉抑聲動力作用制雞胚CAM新生血管的最佳參數(shù)為超聲輻照聲強為1.5 w/cm2，輻照時間為90S，血卟啉濃度為50μg/ml。本實驗選擇此最佳參數(shù)。 第二部分超聲激活血卟啉聲動力作用抑制絨毛尿囊膜新生血管形成實驗 目的：觀察和檢測超聲激活血卟

6、啉聲動力作用對新生血管形成的抑制作用。 方法：采用等級評定方法、DFY軟件、HE染色法觀察超聲激活血卟啉聲動力作用對CAM新生血管形成的抑制作用。 結果：等級評定結果顯示：各組中雞胚的血管生長狀態(tài)等級不同，經(jīng)檢驗發(fā)現(xiàn)，空白組和血卟琳組之間差異無顯著統(tǒng)計學意義(P＞0.01)，說明單純血卟啉基本不影響血管新生；單純超聲組和血卟啉SDT組與之相比較差異均有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，說明單純超聲組和血卟啉SDT組有明顯抑

7、制雞胚CAM上新生血管形成的作用，其中血卟啉SDT組的3+，4+明顯比單純超聲組增多，其差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，說明血卟啉SDT組抑制血管生成效應強于單純超聲組；DFY數(shù)據(jù)顯示：空白對照組、單純血卟啉組、單純超聲組、血卟啉SDT組的血管面積百分比分別為：88.88±7.43、85.67±9.42、74.82±16.92、60.83±11.63。與空白對照組相比，單純超聲組、血卟啉SDT組與之差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.0

8、1)；單純超聲組與血卟啉SDT組之間比較，差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；單純血卟啉組與空白對照組比較差異無顯著統(tǒng)計學意義； HE 染色數(shù)據(jù)顯示：空白組、單純血卟啉組、單純超聲組、血卟啉SDT組的血管密度分別為8.50±2.57、7.21±2.05、4.82±1.43、1.59±0.26。與空白對照組相比，單純超聲組、血卟啉SDT組與之差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，單純超聲組與血卟啉SDT組之間比較，差異有顯著統(tǒng)計學意義(

9、P＜0.01)，單純血卟啉組與空白組比較差異無顯著統(tǒng)計學意義(P＞0.01)。 結論：超聲激活血卟啉聲動力作用顯著抑制雞胚絨毛尿囊膜新生血管形成。 第三部分超聲激活血卟啉聲動力作用抑制絨毛尿囊膜新生血管形成的機理研究目的：觀察和檢測超聲激活血卟啉聲動力作用抑制雞胚絨毛尿囊膜新生血管形成的可能機理。 方法：應用VEGF免疫組化的方法初步觀察超聲激活血卟啉聲動力作用抑制雞胚絨毛尿囊膜新生血管的作用機理。 結果

10、：免疫組化數(shù)據(jù)顯示：空白組、血卟啉組、單純超聲組、血卟啉SDT組的VEGF平均光密度分別為0.46±0.07、0.40±0.10、0.26±0.05、0.14±0.07。與空白對照組相比，血卟啉組差異無顯著統(tǒng)計學意義(P＞0.01)；單純超聲組、血卟啉SDT組與之差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；單純超聲組與血卟啉SDT組之間比較，差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。 結論：超聲激活血卟啉聲動力作用對VEGF表達具有顯著的