SUFU和相關(guān)microRNAs在胰腺癌發(fā)病中的作用研究.pdf

1、本課題將SUFU及相關(guān)microRNAs作為研究靶點，深入研究其在胰腺癌發(fā)病中的作用。本研究包括三部分內(nèi)容，分述如下。 一、人胰腺癌組織細胞中SUFU基因的表達 目的：檢測在正常胰腺組織、胰腺癌組織和相應(yīng)癌旁組織及四株胰腺癌細胞株中SUFU基因mRNA的表達情況，探討SUFU在胰腺癌發(fā)病機制中的作用。 方法：收集21例手術(shù)切除的胰腺癌組織及18例相應(yīng)癌旁組織和3例正常胰腺組織，四株胰腺癌細胞株為長海消化內(nèi)科實驗室

2、保存。采用Real-time RT-PCR法(SYBRGREEN法)檢測上述來源組織細胞中SUFU基因mRNA的表達情況。 結(jié)果：以正常胰腺組織為對照，21例胰腺癌組織和癌旁組織中SUFU mRNA的相對表達量分別為2.186±3.903和2.437±1.828，SUFU在癌組織與癌旁組織中表達無顯著差異(P＞0.05)。4株胰腺癌細胞株SUFU mRNA的相對表達量的3次獨立檢測均數(shù)依次為CFPAC0.375±0.01，Pan

3、c-12.184±0.03，SW19902.506±2.051，PaTu89881.027±0.137。 結(jié)論：SUFU在癌組織與癌旁組織中表達無顯著差異。 二、人胰腺癌組織中SUFU表達與臨床和病理特征的相關(guān)性研究 目的：在人胰腺癌組織和相應(yīng)癌旁組織中檢測SIJFU蛋白的表達情況，分析胰腺癌組織中SUFU蛋白表達水平與胰腺癌患者臨床和病理特征的相關(guān)性。檢測胰腺癌細胞株中SUFU蛋白的表達情況。 方法：收

4、集2007年3月～2008年3月長海醫(yī)院手術(shù)切除的28例胰腺癌患者的胰腺癌組織和相應(yīng)癌旁組織，同時收集患者臨床資料。所有病例均經(jīng)病理確診為胰腺導(dǎo)管腺癌。采用鏈霉素抗生物素-過氧化酶(streptavidin peroxidase，SP)免疫組織化學(xué)法檢測胰腺癌和相應(yīng)癌旁組織中SUFU蛋白表達。細胞膜和細胞質(zhì)的棕黃色或棕褐色染色定位細胞染色陽性。光鏡下隨機計數(shù)1000個腫瘤細胞，計算染色陽性細胞所占的百分數(shù)，同時設(shè)定染色細胞≥20％的組織

5、標本為SUFU蛋白表達陽性標本。 結(jié)果：胰腺導(dǎo)管細胞癌的胞漿和胞核均可呈現(xiàn)SUFU蛋白染色。胰腺癌組織中78.57％(22/28)存在SUFU的陽性表達，癌旁組織和正常胰腺組織中無SUFU蛋白陽性表達，兩者之間存在顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。SUFU蛋白高表達與胰腺癌患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)，而與腫瘤的臨床分期呈顯著正相關(guān)。SUFU蛋白在胰腺癌細胞株P(guān)aTu8988和SW19

6、90中表達陽性，蛋白定位在細胞核，CFPAC細胞株SUFU胞核胞漿表達，PANC-1細胞株SUFU蛋白無表達。 結(jié)論：78％的胰腺癌組織SUFU蛋白異常高表達，此高表達與患者的臨床分期呈正相關(guān)，提示SUFU異常高表達參與胰腺癌發(fā)生和發(fā)展，為胰腺癌惡性特征之一。 三、胰腺癌細胞株中SUFU相關(guān)microRNAs表達的檢測及與其mRNA和蛋白表達的相關(guān)性分析 目的：在四株胰腺癌細胞株中檢測SUFU相關(guān)microRNA

7、s(miR-155和miR-107)的表達，并分析SUFU mRNA、蛋白質(zhì)和相關(guān)microRNAs表達的相關(guān)性。 方法：應(yīng)用預(yù)測軟件篩選出與SUFU相關(guān)的microRNAs的兩條，即miR-155、miR-107，利用SYBR Green實時定量PCR法檢測4株胰腺癌細胞株中miR-155、miR-107的表達，應(yīng)用SPSS統(tǒng)計軟件分析胰腺癌細胞株中SUFU mRNA、蛋白質(zhì)和相關(guān)microRNAs表達的相關(guān)性。 結(jié)果

8、：各胰腺癌細胞株中miR-107和miR-155均高表達且程度不一，miR-107在胰腺癌細胞株中的表達依次為Panc-1(9.33±1.26)，SW1990(8.05±1.08)，CFPAC(6.466±1.068)和Patu8988(3.51±0.10)，各組之間存在顯著差異(p＜0.05)。miR-155在胰腺癌細胞株中的表達依次為CFPAC(488.7±43.063)，Panc-1(44.5±25.939)，SW1990(38.

9、8±15.04)和Patu8988(0.66±0.184)，各組之間存在顯著差異(p＜0.05)。相關(guān)性統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，在細胞株中SUFU mRNA相對表達量與miR-107相對表達量呈正相關(guān)(Spearman’s R=0.755。p=0.031)，而與SUFU蛋白表達程度存在一定負相關(guān)性(Spearman’s R=-0.776，p=0.024)，即①在mRNA和miR-107相對表達量較高的PANC-1細胞中，SUFU蛋白表達陰性，提示

10、miR-107干擾了mRNA的翻譯；②在mRNA和miR-107相對表達量同時次之的SW1990和Patu8988細胞中，SUFU蛋白僅胞核表達；③在mRNA和miR-107相對表達量均較少的CFPAC細胞中，SUFU蛋白胞漿和胞核均表達。 結(jié)論：miR-155和miR-107在各胰腺癌細胞株均高表達，提示其在腫瘤發(fā)生中具有一定作用。但僅發(fā)現(xiàn)miR-107與SUFU mRNA相對表達量正相關(guān)，同時與SUFU蛋白表達負相關(guān)，提示僅