長(zhǎng)托寧對(duì)內(nèi)毒素休克兔的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、本文通過(guò)建立兔內(nèi)毒素休克模型，觀察長(zhǎng)托寧對(duì)內(nèi)毒素休克兔血流動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞因子、各器官組織形態(tài)學(xué)的影響，進(jìn)一步探討長(zhǎng)托寧在內(nèi)毒素休克兔中的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制，以及臨床應(yīng)用中可選擇的合適的劑量范圍，為擴(kuò)大長(zhǎng)托寧的臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。 研究材料和方法： 1.實(shí)驗(yàn)材料和方法。 將35只新西蘭大白兔隨機(jī)分成5組。分別為正常對(duì)照組(n=7)、休克組(n=7)、長(zhǎng)托寧低劑量組(n=7)、長(zhǎng)托寧中劑量組(n=7)、長(zhǎng)托

2、寧高劑量組(n=7)。參照MartinAlbert方法制作內(nèi)毒素休克兔模型。耳緣靜脈注射20％烏拉坦(1000mg/kg)麻醉。將兔仰臥固定在手術(shù)臺(tái)，剪去頸部被毛，碘伏消毒，切開(kāi)氣管，保持呼吸道通暢，無(wú)菌分離一側(cè)頸動(dòng)脈和頸靜脈，用聚乙烯塑料管進(jìn)行插管。頸動(dòng)脈管經(jīng)三通閥與血壓換能器相連接，插管后立即注入0.3mL肝素生理鹽水(含肝素300iu)，通過(guò)BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)連續(xù)描記血壓、心率。頸靜脈管用于給藥及輸液。按600μg/kg

3、靜脈注射大腸桿菌脂多糖(LPS)，每毫克LPS溶于2mL生理鹽水，1分鐘注射完畢。休克組靜注LPS后立即靜注1mL/kg生理鹽水。長(zhǎng)托寧低、中、高劑量組分別于靜注LPS后立即靜注長(zhǎng)托寧0.05、0.15、0.45mg/kg，靜注前用生理鹽水稀釋至1mL/kg。正常對(duì)照組注射等量生理鹽水。 記錄給藥后每隔30分鐘的心率及血壓，分別于不同時(shí)間點(diǎn)留取靜脈血約3mL,離心后留取血清，用于測(cè)定腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO

4、)、內(nèi)皮素-1(ET-1)含量。給藥6小時(shí)后實(shí)驗(yàn)結(jié)束，處死動(dòng)物。打開(kāi)腹腔，取兔的心、肺、肝、腎、回腸，以10％福爾馬林固定，常規(guī)制作石蠟切片，H.E染色，光學(xué)顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察及回腸上皮損傷指數(shù)測(cè)定。取回腸(距回腸末端7cm取1cm腸段)，5％戊二醛固定，電鏡觀察。 2.檢測(cè)指標(biāo)。 2.1各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同時(shí)間點(diǎn)的血壓與心率變化。 2.2各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物TNF-α、NO、ET-1含量測(cè)定。 2.3光學(xué)顯微鏡下心、

5、肺、肝、腎、回腸粘膜形態(tài)學(xué)變化及回腸上皮損傷指數(shù)測(cè)定。 2.4電子顯微鏡下回腸粘膜的形態(tài)學(xué)改變。 3.檢測(cè)方法。 TNF-α的檢測(cè)采用雙抗體夾心酶標(biāo)法測(cè)定(ELISA法)，試劑盒由上海軒昊科技發(fā)展有限公司提供；NO的檢測(cè)采用化學(xué)反應(yīng)法，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供；ET-1的檢測(cè)采用放射免疫法，試劑盒由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供。檢測(cè)方法均按照試劑盒說(shuō)明操作。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 采用S

6、PSS13.0軟件包處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±S)或以均數(shù)((-x))表達(dá)；正態(tài)分布變量多組間比較用方差分析；兩組間比較，正態(tài)分布變量用t檢驗(yàn)，P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 研究結(jié)果 1.兔血壓及心率的變化。 與休克組相比，長(zhǎng)托寧中、高劑量組動(dòng)物的心率有明顯改善，而低劑量組改善不明顯。給藥后90分鐘，中劑量組動(dòng)物血壓較休克組明顯改善，低、高劑量組改善不明顯。實(shí)驗(yàn)全過(guò)程中，中劑量組動(dòng)物心率及血壓下

7、降程度較小，波動(dòng)較小。 2.TNF-α、NO、ET-1含量的變化。 相對(duì)于正常對(duì)照組，休克組及長(zhǎng)托寧低、中、高劑量組動(dòng)物血清TNF-α、NO、ET-1含量均顯著升高。而與休克組相比，長(zhǎng)托寧低、中、高劑量組動(dòng)物血清TNF-α、NO、ET-1含量均有不同程度下降，中劑量組下降更明顯。 3.光學(xué)顯微鏡檢查。 休克組動(dòng)物心、肺、肝、腎、回腸組織均有明顯細(xì)胞變性、壞死，間質(zhì)充血、水腫、出血，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。長(zhǎng)托寧低

8、、中、高劑量組動(dòng)物各組織病變不同程度較休克組減輕，中劑量組病變減輕更明顯。 3.1心臟：長(zhǎng)托寧低、高劑量組心肌纖維水腫，間質(zhì)充血、水腫，間隙增大。中劑量組僅見(jiàn)心肌纖維及間質(zhì)輕度水腫。 3.2肺：長(zhǎng)托寧低、高劑量組肺泡隔增厚，粒細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔及小血管可見(jiàn)聚集的紅細(xì)胞，部分肺泡腔萎縮。中劑量組僅見(jiàn)肺泡隔輕度增厚并少量粒細(xì)胞及紅細(xì)胞浸潤(rùn)。 3.3肝：長(zhǎng)托寧低、高劑量組肝細(xì)胞水腫、壞死，肝竇內(nèi)充血，可見(jiàn)粒細(xì)胞浸潤(rùn)。中劑

9、量組僅見(jiàn)少許粒細(xì)胞浸潤(rùn)，肝竇內(nèi)可見(jiàn)少量紅細(xì)胞。 3.4腎：長(zhǎng)托寧低、高劑量組腎小管上皮細(xì)胞水腫，部分腎小管上皮變性，腎小球毛細(xì)血管腔擴(kuò)張、充血，粒細(xì)胞浸潤(rùn)。中劑量組僅見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞輕度水腫，腎小球毛細(xì)血管腔及間質(zhì)少許充血及粒細(xì)胞浸潤(rùn)。 3.5回腸：長(zhǎng)托寧低、高劑量組回腸粘膜及粘膜下層間質(zhì)毛細(xì)血管充血、水腫，間質(zhì)內(nèi)大量粒細(xì)胞浸潤(rùn)，絨毛廣泛水腫，絨毛的上皮細(xì)胞壞死、脫落、糜爛。中劑量組僅見(jiàn)回腸粘膜及粘膜下層粒細(xì)胞浸潤(rùn)，絨毛

10、形態(tài)較完整，間質(zhì)充血不明顯。 4.回腸組織Chiu's法評(píng)分 休克組及長(zhǎng)托寧低、中、高劑量組回腸組織評(píng)分均顯著高于正常組。與休克組相比，長(zhǎng)托寧低、中、高劑量組評(píng)分不同程度降低，中劑量組降低更明顯。5.回腸組織電子顯微鏡檢查 休克組動(dòng)物回腸微絨毛腫脹、縮短、稀疏，線粒體重度腫脹，嵴斷裂，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)顯著擴(kuò)張，細(xì)胞排列不整，核固縮，可見(jiàn)凋亡細(xì)胞。長(zhǎng)托寧低、中、高劑量組動(dòng)物回腸組織病變不同程度較休克組減輕，中劑量組病變程度最