復(fù)方苦參對內(nèi)毒素致兔急性呼吸窘迫綜合征保護作用機制的研究.pdf

1、目的:
　　急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是威脅人類健康的嚴(yán)重危重癥之一,其發(fā)病機理至今尚未闡明,病死率極高,為臨床亟待解決的一個主要課題。本實驗以大腸桿菌內(nèi)毒素(其主要致病成分為脂多糖LPS)復(fù)制兔ARDS模型,通過觀察模型動物病理生理及病理變化,探討內(nèi)毒素(ET)致傷機理及復(fù)方苦參的保護性作用,旨在為臨床提供理論參考。
　　方法:
　　隨機將21只新西蘭白兔分為3組:對照組(A組)、致傷組(B組)和治療組(C組),

2、每組7只。實驗前12h禁食、禁水,25％烏拉坦(4ml/kg)腹腔麻醉,分離左側(cè)頸動脈,檢測生命體征和采集血液標(biāo)本,建立耳緣靜脈通道用于給藥。A組靜脈注射生理鹽水(4ml/kg),B、C兩組經(jīng)靜脈一次性注射LPS720ug/kg體重復(fù)制兔的ARDS模型,C組同時靜脈注射復(fù)方苦參注射液(4ml/kg)進行干預(yù)治療。具體檢測指標(biāo)如下:
　　1.0h、0.5h、1h、2h、4h點記錄血壓、呼吸等生命體征;
　　2.0h、0.5h、

3、1h、2h、4h點測量動脈血氣;
　　3.測定肺組織濕干重比;
　　4.光鏡下觀察各組動物肺組織病理學(xué)改變;
　　5.免疫組化方法測定各組動物肺組織髓樣細胞觸發(fā)性受體1(TREM-1)、髓過氧化物酶(MPO)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、細胞間粘附因子-1(ICAM-1)、水通道蛋白-1(AQP-1)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達。
　　結(jié)果:
　　1.A組在實驗過程中各項實驗指標(biāo)相對平穩(wěn),三組間

4、在實驗前各項實驗指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　2.生命體征測定:
　　(1)呼吸:靜注LPS后,B組動物出現(xiàn)呼吸急促,最快頻率約78次/分,0.5h變化最為顯著,之后呼吸頻率逐漸下降;C組亦出現(xiàn)先快后慢的變化趨勢。
　　(2)血壓:A組動物在整個實驗中血壓維持在93mHg以上;B組在給LPS后0.5h,血壓明顯下降,明顯低于A組(P<0.01);C組實驗后血壓亦呈下降趨勢,其各時點顯著低于A組但明顯高于B組。
　　(3

5、)血氣分析:A組動物血氣分析值均在正常范圍,靜注LPS后,B組兔血PaO2及Pa02/Fi02顯著降低,0.5h為最低點,分別為55.23mmHg和258.7mmHg,符合ARDS診斷標(biāo)準(zhǔn),之后隨著時間延長逐漸恢復(fù)。C組兔Pa02/Fi02值在0.5h點雖然有所下降,與A組比較有差異(P<0.05),但未達到ARDS診斷標(biāo)準(zhǔn),仍部分高于B組(P<0.01)。PaCO2在B組和C組均有下降。
　　3.實驗4h后,B組肺組織濕/干比顯

6、著高于A組(P<0.01),C組明顯高于A組(P<0.01)但低于B組(P<0.05);
　　4.肺組織光鏡下病理學(xué)檢查:A組肺泡結(jié)構(gòu)基本正常,肺泡腔內(nèi)無明顯出血、滲出等;B組可見肺泡間隔增厚、充血、肺水腫表現(xiàn),肺泡腔變小,其內(nèi)可見紅染物質(zhì)滲出及散在蔟集的中性粒細胞粘壁、扣押,可見小灶性肺不張;C組肺泡間隔輕度增厚,肺泡腔較B組增大,炎細胞浸潤減少,肺泡淤血水腫減輕,肺損傷輕于內(nèi)毒素組。
　　5.免疫組化方法測定TREM-1

7、表達結(jié)果:A組中未見明顯TREM-1表達;B組肺泡間隔、中性粒細胞可見大量深棕色顆粒;C組肺泡間隔、中性粒細胞可見深棕色顆粒較致傷組明顯減少。
　　6.免疫組化方法測定MPO表達結(jié)果:A組肺組織中MPO幾乎無表達;B組致傷組的陽性表達產(chǎn)物為棕黃色,多分布在肺泡壁、肺泡間隔及中性粒細胞的細胞膜中,C組中棕黃色產(chǎn)物減少。
　　7.免疫組化方法測定TNF-α表達結(jié)果:A組肺泡腔內(nèi)可見少許淡黃色片狀或顆粒狀產(chǎn)物輕度表達;致傷組陽性產(chǎn)

8、物呈棕黃色或深棕色,多分布在肺組織的中性粒細胞、巨噬細胞的細胞質(zhì)中。C組陽性表達產(chǎn)物較B組減輕。
　　8.免疫組化方法測定ICAM-1表達的結(jié)果:A組正常肺組織中無明顯ICAM-1表達;B組致傷組ICAM-1明顯表達,肺泡間隔、血管內(nèi)皮細胞胞漿中均可見大量深棕色顆粒;C組可見數(shù)量不等的棕黃色顆粒,但數(shù)量較致傷組明顯減少。
　　9.免疫組化方法測定AQP-1表達結(jié)果:A組肺組織中無AQP-1表達;B組陽性產(chǎn)物呈棕黃色,主要在肺

9、泡間隔及肺泡上皮細胞的胞漿中表達,C組肺泡腔中可見少許炎性細胞浸潤,棕黃色表達產(chǎn)物減少,AQP-1表達減弱。
　　10.免疫組化方法測定VEGF表達結(jié)果:A組肺組織中的VEGF水平處于低表達狀態(tài);而B組肺組織中表達明顯,表達產(chǎn)物呈棕黃色,多分布于血管內(nèi)皮細胞、肺泡上皮細胞的胞膜或胞漿中;C組肺泡間隔增厚減輕,棕黃色表達產(chǎn)物減少,VEGF表達減弱。
　　結(jié)果判定:不著色為陰性,淡黃色為弱陽性(+),深棕色為強陽性(+++),中

10、度陽性介于弱陽性與強陽性之間(++)。
　　結(jié)論:
　　1.一次性靜脈注射LPS(720ug/kg)可以建立兔ARDS動物模型。
　　2. ARDS時炎癥反應(yīng)失控,促炎反應(yīng)和抗炎反應(yīng)平衡失調(diào)。
　　3.內(nèi)毒素致傷組肺組織出現(xiàn)內(nèi)皮細胞腫脹、炎性細胞浸潤、微循環(huán)障礙等一系列病理生理變化。
　　4.免疫組化方法測定TREM-1、MPO、TNF-α、ICAM-1、AQP-1、VEGF各項指標(biāo)在LPS致傷組均有明顯表