人牙齦成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)分化為骨骼肌樣細(xì)胞的探討.pdf

1、目的:口腔牙齦是牙周支持組織之一，主要由成纖維細(xì)胞組成。國(guó)內(nèi)外許多研究證明，人體內(nèi)的成纖維細(xì)胞具有干細(xì)胞特征[1-4]。正常情況下，牙齦組織具有極強(qiáng)的修復(fù)功能，其修復(fù)活動(dòng)是通過(guò)牙齦中成纖維細(xì)胞不同細(xì)胞亞群的定向遷移和分化實(shí)現(xiàn)的[5，6]。
　　 口腔的基本生理功能如咀嚼、發(fā)音和面部表情運(yùn)動(dòng)都需要骨骼肌的收縮功能來(lái)完成。由于肌細(xì)胞再生能力很弱，肌肉損傷后，通常由成纖維細(xì)胞形成的肉芽組織充填，瘢痕修復(fù)。因此，如果能使成纖維細(xì)胞向骨骼

2、肌細(xì)胞方向分化，可以減少瘢痕的形成，為骨骼肌細(xì)胞的再生提供了新的細(xì)胞來(lái)源。本研究擬采用體外培養(yǎng)牙齦成纖維細(xì)胞，使其誘導(dǎo)分化為骨骼肌樣細(xì)胞，探討牙齦成纖維細(xì)胞向骨骼肌細(xì)胞分化的潛能和可能性。
　　 方法:
　　 1、人牙齦成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定
　　 收集河北醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院口腔頜面外科下頜阻生齒拔出后切除的牙齦組織。采用組織塊培養(yǎng)法，培養(yǎng)液選用含20％胎牛血清的低糖DMEM，0.25％胰酶?jìng)鞔?，采用波形蛋白（vi

3、mentin）和骨骼肌肌動(dòng)蛋白(α-sarcometricactin)&肌球蛋白(myosin)的免疫細(xì)胞化學(xué)、Masson特殊染色進(jìn)行鑒定。
　　 2、人牙齦成纖維細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)
　　 采用含10％胎牛血清DMEM/F12混合培養(yǎng)液，應(yīng)用5-氮雜胞苷（azacytidine，5-aza）、成肌分化因子(myogenicdifferentiationfactor,Myod)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（insulin-like

4、growthfactors-1，IGF-1）對(duì)第3代人牙齦成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)38天，采用vimentin和α-sarcometricactin&myosin的免疫細(xì)胞化學(xué)、Masson特殊染色進(jìn)行鑒定。掃描電鏡觀(guān)察骨骼肌樣細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征。
　　 結(jié)果:
　　 1、人牙齦成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定
　　 牙齦組織原代培養(yǎng)7～10天，細(xì)胞爬出，成纖維細(xì)胞呈梭形、胞體大，核大，圓形或橢圓形，有1～3個(gè)核仁。第3代細(xì)胞波