不同濃度葡萄糖、胰島素和不同氧化應(yīng)激狀態(tài)對脂肪細(xì)胞Visfatin表達(dá)的影響.pdf

1、目的：Visfatin是新近發(fā)現(xiàn)的一種脂源性細(xì)胞因子，能促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化與成熟，與胰島素抵抗（IR）、代謝綜合征及2型糖尿病（T2DM）的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。闡明Visfatin的調(diào)節(jié)機(jī)制對于揭示肥胖導(dǎo)致的糖尿病、胰島素抵抗的發(fā)生機(jī)制及其防治有重要意義。本文通過觀察體外培養(yǎng)的成熟脂肪細(xì)胞在不同濃度葡萄糖、過氧化氫和胰島素干預(yù)后Visfatin mRNA和蛋白的表達(dá)情況，了解Visfatin的影響因素，探討Visfatin在肥胖和糖尿病

2、發(fā)病過程中的作用。 方法：以鼠3T3—L1前脂肪細(xì)胞系（購于中科院上海細(xì)胞庫）為研究對象。3T3—L1細(xì)胞按照常規(guī)的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)法培養(yǎng)并誘導(dǎo)分化成熟，油紅O染色鑒定脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成功。將誘導(dǎo)成熟的脂肪細(xì)胞用含0．5％牛血清白蛋白的DMEM培養(yǎng)液共同培養(yǎng)6小時后，分為三組，分別用5mmol/L、25mmol/L、45mmol/L和60mmol/L，葡萄糖干預(yù)48小時；0．01μmol/L、0．1μmol/L和1μmol/L胰島素

3、干預(yù)48小時；0．2mmol/L、0．5mmol/L和1mmol/L過氧化氫干預(yù)10min后，換回不含過氧化氫的原培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)6小時。MTT檢測細(xì)胞活力；提取各組細(xì)胞總RNA和總蛋白，RT—PCR和western blot測定Visfatin mRNA和蛋白的表達(dá)，以β—actin為內(nèi)參照。以未加任何藥物干預(yù)組做對照，整個實(shí)驗(yàn)過程重復(fù)4次。 結(jié)果：①不同濃度葡萄糖、過氧化氫和胰島素干預(yù)后，與對照組相比，各組脂肪細(xì)胞活力的差異無

4、統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0．05）。②與對照組相比，5mmol/L葡萄糖組、25mmol/L葡萄糖組、45mmol/L葡萄糖組和60mmol/L葡萄糖組3T3—L1脂肪細(xì)胞Visfatin mRNA的表達(dá)量分別下降16．45％（P<0．05）、23．58％（P<0．05）、56．27％（P<0．01）和58．61％（P<0．01），蛋白表達(dá)量分別下降33．97％、38．30％、54．32％和56．94％（P均<0．01）。隨著葡萄糖濃度的增加

5、，脂肪細(xì)胞Visfatin mRNA和蛋白的表達(dá)量逐漸下降，且呈劑量依賴性。5mmol/L葡萄糖組與25mmol/L葡萄糖組比較，45mmol/L葡萄糖組與60mmol/L葡萄糖組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0．05）；45mmol/L葡萄糖組與5mmol/L葡萄糖組和25mmol/L葡萄糖組比較，Visfatin mRNA的表達(dá)量分別下降47．67％和42．78％（P均<0．01），蛋白表達(dá)量分別下降30．82％和25．96％（P均<

6、0．01）；60mmol/L葡萄糖組與5mmol/L葡萄糖組和25mmol/L葡萄糖組比較，Visfatin mRNA的表達(dá)量分別下降50．46％和45．83％（P均<0．01），蛋白表達(dá)量分別下降34．79％和30．22％（均P<0．05）。③與對照組相比，0．2mmol/L過氧化氫組、0．5mmol/L過氧化氫組和1mmol/L過氧化氫組3T3—L1脂肪細(xì)胞Visfatin mRNA的表達(dá)量分別下降70．17％、67．35％和57．

7、32％（P均<0．01），蛋白表達(dá)量分別下降22．79％、35．38％和30．26％（P均<0．01）；各過氧化氫組Visfatin mRNA和蛋白的表達(dá)量隨著過氧化氫濃度的增加雖略有上升，但是各組之間的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0．05）。④與對照組相比，雖然各組Visfatin mRNA和蛋白的表達(dá)量均有下降，但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0．05），而且各組之間的比較差異也無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0．05）。 結(jié)論：高濃度葡萄糖能夠