耐受性樹突狀細胞對哮喘小鼠氣道變應性炎癥反應的抑制作用.pdf

1、哮喘(asthma)是嚴重危害現(xiàn)代人健康的疾病，其中又以過敏性哮喘最為常見。過敏性哮喘又稱變應性哮喘，以肺部嗜酸性粒細胞浸潤、氣道粘液增多及氣道高反應性為主要特征，臨床表現(xiàn)為反復發(fā)作的喘息、呼氣性呼吸困難、胸悶、咳嗽等癥狀。近年來哮喘的發(fā)病呈日益上升的趨勢，而對哮喘的治療仍以擴張支氣管、抗炎、平喘等對癥處理為主，尚無更好的辦法，故尋找新的、有效的治療方法十分迫切。 廣泛分布于呼吸道粘膜及肺間質的氣道樹突狀細胞(DC)被認為是決定

2、機體對吸入氣道的抗原究竟保持耐受還是引發(fā)免疫應答的關鍵。正常機體氣道DC攝取并處理外來無害抗原或局部自身抗原后，歸巢至引流淋巴結，將抗原遞呈給T淋巴細胞，引起抗原特異性T細胞克隆清除，從而維持機體生理功能的恒定。然而，過敏體質者接觸變應原后，呼吸道組織內DC攜帶捕獲的變應原進入DLN，激活初始T細胞，主要促進T細胞向2型輔助性T細胞(Th2)方向分化并增殖，引發(fā)變應性炎癥反應，導致哮喘發(fā)作。 DC是迄今為止發(fā)現(xiàn)的抗原提呈功能最強

3、的抗原提呈細胞(APC)，其不僅2可以激活淋巴細胞，還能誘導免疫耐受。誘導免疫耐受是目前治療自身免疫病(包括哮喘)的重要途徑之一，其誘導的耐受效果及其機制是當今該領域的研究熱點。不同的DC亞群能誘導不同類型的免疫應答。近年來已有學者嘗試通過體外修飾DC使之成為能較為穩(wěn)定地誘導免疫耐受的DC(耐受性DC)進而輸入動物模型體內以治療某些自身免疫性疾病。研究發(fā)現(xiàn)，不成熟DC(imDC)或白細胞介素-10(IL-10)等處理的DC能夠誘導CD4

4、+T細胞同種抗原特異性無能應答(anergy)而產(chǎn)生機體的免疫耐受。本實驗試圖通過抗原沖擊的imDC或修飾的imDC免疫小鼠，誘導抗原特異性的免疫耐受，觀察其作為DC疫苗對小鼠哮喘模型的氣道變應性炎癥反應的抑制作用并研究其相關機制。 本課題以雞卵白蛋白(OVA)作為過敏原，選擇6～8周齡的雄性BALB/c小鼠以常規(guī)方法建立哮喘模型，具體為：第0天(d0)腹股溝皮下注射OVA初次致敏，第9天(d9)腹腔注射OVA加強致敏，d14-

5、20連續(xù)7天予OVA氣霧攻擊。鑒于imDC具有誘導免疫耐受的能力，采集BALB/c小鼠的骨髓制備imDC，于首次致敏前7天(-7d)免疫哮喘模型小鼠，并于霧化攻擊完畢后次日(即d21)收集相關樣本進行哮喘指標的檢測(肺部炎癥浸潤、粘液分泌及細胞因子的表達)，觀察imDC免疫能否抑制小鼠的氣道變應性炎癥。有研究認為經(jīng)IL-10刺激的imDC具有更強的誘導免疫耐受的能力，因此在收集imDC24小時前向培養(yǎng)基中添加重組鼠IL-10(rmIL-

6、10)，并同樣于初次致敏前7天收集這些DC(imDCIL-10)并過繼性轉入哮喘小鼠模型，觀察其對哮喘癥狀的抑制效果。 實驗結果表明，imDC和imDCIL-10表面表達的MHCⅡ類分子和其他共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD54的水平都顯著低于mDC；以OVA抗原肽沖擊imDC和imDCIL-10制備成耐受性疫苗，同種混合淋巴細胞反應(MLR)結果顯示其體外刺激同種淋巴細胞增殖的能力也弱于mDC，進一步體內實驗發(fā)現(xiàn)二

7、者免疫后均能明顯減少哮喘小鼠肺部嗜酸性粒細胞及其他炎癥細胞浸潤、抑制氣道杯狀細胞增生及黏液分泌，同時下調Th2型細胞因子IL-4及IL-13的表達；還觀察到imDC或imDCIL-10能夠誘導哮喘小鼠脾臟內CD4+CD25+調節(jié)性T細胞比例升高，而已知CD4+CD25+調節(jié)性T細胞是參與建立外周耐受的重要因素。但本實驗未發(fā)現(xiàn)imDCIL-10具有比imDC更好的抑制變應性炎癥的效果，此結果有待于進一步驗證?？傊?，耐受性DC疫苗能夠減弱小