耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞對(duì)哮喘小鼠氣道變應(yīng)性炎癥反應(yīng)的抑制作用.pdf

1、哮喘(asthma)是嚴(yán)重危害現(xiàn)代人健康的疾病，其中又以過(guò)敏性哮喘最為常見(jiàn)。過(guò)敏性哮喘又稱(chēng)變應(yīng)性哮喘，以肺部嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、氣道粘液增多及氣道高反應(yīng)性為主要特征，臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的喘息、呼氣性呼吸困難、胸悶、咳嗽等癥狀。近年來(lái)哮喘的發(fā)病呈日益上升的趨勢(shì)，而對(duì)哮喘的治療仍以擴(kuò)張支氣管、抗炎、平喘等對(duì)癥處理為主，尚無(wú)更好的辦法，故尋找新的、有效的治療方法十分迫切。 廣泛分布于呼吸道粘膜及肺間質(zhì)的氣道樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)被認(rèn)為是決定

2、機(jī)體對(duì)吸入氣道的抗原究竟保持耐受還是引發(fā)免疫應(yīng)答的關(guān)鍵。正常機(jī)體氣道DC攝取并處理外來(lái)無(wú)害抗原或局部自身抗原后，歸巢至引流淋巴結(jié)，將抗原遞呈給T淋巴細(xì)胞，引起抗原特異性T細(xì)胞克隆清除，從而維持機(jī)體生理功能的恒定。然而，過(guò)敏體質(zhì)者接觸變應(yīng)原后，呼吸道組織內(nèi)DC攜帶捕獲的變應(yīng)原進(jìn)入DLN，激活初始T細(xì)胞，主要促進(jìn)T細(xì)胞向2型輔助性T細(xì)胞(Th2)方向分化并增殖，引發(fā)變應(yīng)性炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致哮喘發(fā)作。 DC是迄今為止發(fā)現(xiàn)的抗原提呈功能最強(qiáng)

3、的抗原提呈細(xì)胞(APC)，其不僅2可以激活淋巴細(xì)胞，還能誘導(dǎo)免疫耐受。誘導(dǎo)免疫耐受是目前治療自身免疫病(包括哮喘)的重要途徑之一，其誘導(dǎo)的耐受效果及其機(jī)制是當(dāng)今該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。不同的DC亞群能誘導(dǎo)不同類(lèi)型的免疫應(yīng)答。近年來(lái)已有學(xué)者嘗試通過(guò)體外修飾DC使之成為能較為穩(wěn)定地誘導(dǎo)免疫耐受的DC(耐受性DC)進(jìn)而輸入動(dòng)物模型體內(nèi)以治療某些自身免疫性疾病。研究發(fā)現(xiàn)，不成熟DC(imDC)或白細(xì)胞介素-10(IL-10)等處理的DC能夠誘導(dǎo)CD4

4、+T細(xì)胞同種抗原特異性無(wú)能應(yīng)答(anergy)而產(chǎn)生機(jī)體的免疫耐受。本實(shí)驗(yàn)試圖通過(guò)抗原沖擊的imDC或修飾的imDC免疫小鼠，誘導(dǎo)抗原特異性的免疫耐受，觀察其作為DC疫苗對(duì)小鼠哮喘模型的氣道變應(yīng)性炎癥反應(yīng)的抑制作用并研究其相關(guān)機(jī)制。 本課題以雞卵白蛋白(OVA)作為過(guò)敏原，選擇6～8周齡的雄性BALB/c小鼠以常規(guī)方法建立哮喘模型，具體為：第0天(d0)腹股溝皮下注射OVA初次致敏，第9天(d9)腹腔注射OVA加強(qiáng)致敏，d14-

5、20連續(xù)7天予OVA氣霧攻擊。鑒于imDC具有誘導(dǎo)免疫耐受的能力，采集BALB/c小鼠的骨髓制備imDC，于首次致敏前7天(-7d)免疫哮喘模型小鼠，并于霧化攻擊完畢后次日(即d21)收集相關(guān)樣本進(jìn)行哮喘指標(biāo)的檢測(cè)(肺部炎癥浸潤(rùn)、粘液分泌及細(xì)胞因子的表達(dá))，觀察imDC免疫能否抑制小鼠的氣道變應(yīng)性炎癥。有研究認(rèn)為經(jīng)IL-10刺激的imDC具有更強(qiáng)的誘導(dǎo)免疫耐受的能力，因此在收集imDC24小時(shí)前向培養(yǎng)基中添加重組鼠IL-10(rmIL-

6、10)，并同樣于初次致敏前7天收集這些DC(imDCIL-10)并過(guò)繼性轉(zhuǎn)入哮喘小鼠模型，觀察其對(duì)哮喘癥狀的抑制效果。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，imDC和imDCIL-10表面表達(dá)的MHCⅡ類(lèi)分子和其他共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD54的水平都顯著低于mDC；以O(shè)VA抗原肽沖擊imDC和imDCIL-10制備成耐受性疫苗，同種混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)結(jié)果顯示其體外刺激同種淋巴細(xì)胞增殖的能力也弱于mDC，進(jìn)一步體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)二

7、者免疫后均能明顯減少哮喘小鼠肺部嗜酸性粒細(xì)胞及其他炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、抑制氣道杯狀細(xì)胞增生及黏液分泌，同時(shí)下調(diào)Th2型細(xì)胞因子IL-4及IL-13的表達(dá)；還觀察到imDC或imDCIL-10能夠誘導(dǎo)哮喘小鼠脾臟內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例升高，而已知CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是參與建立外周耐受的重要因素。但本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)imDCIL-10具有比imDC更好的抑制變應(yīng)性炎癥的效果，此結(jié)果有待于進(jìn)一步驗(yàn)證?？傊褪苄訢C疫苗能夠減弱小