直腸癌抑制性消減雜交片斷在直腸癌組織及正常直腸組織差異表達分析.pdf

1、目的：結(jié)直腸癌(colorectalcancer，CRC)是常見的惡性惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展過程涉及多個癌基因的激活和抑癌基因的失活及錯配修復基因的突變。 我們利用抑制性消減雜交結(jié)合cDNA芯片技術(shù)，篩選出86個差異表達的基因片段，選擇其中四個基因，分別為heatshock10kDaprotein1(HSPE1HSP10)基因、SRY-box9(SOX9)基因、polymericimmunoglobulinreceptor(PIG

2、R)和真核細胞延長因子-1delta(eukaryotictranslationelongationfactor1delta，EEF1-delta)基因。HSPE1與heatshock60kDaprotein1(HSPD1)協(xié)同，幫助HSPD1蛋白行使其功能，參與蛋白質(zhì)的折疊與伸展，多聚復合體的組裝，發(fā)揮其調(diào)節(jié)靶蛋白的作用。SOX9編碼的蛋白質(zhì)與帶HMG-box的其他DNA結(jié)合蛋白一起識別CCTTGAG序列，屬于轉(zhuǎn)錄因子。在軟骨細胞分化

3、中與類固醇生成因子1一起調(diào)節(jié)anti-Muellerianhormone(AMH)基因的轉(zhuǎn)錄。SOX9蛋白缺乏導致長骨發(fā)育不全綜合癥，并時常伴有性別反轉(zhuǎn)。 PIGR在包括肝、乳腺等幾種腺上皮中表達。它調(diào)節(jié)細胞間多聚免疫球蛋白的細胞間轉(zhuǎn)運，為免疫球蛋白超家族的一員，有5個與免疫球蛋白可變區(qū)相似的單位和1個跨膜區(qū)，這個跨膜區(qū)也與免疫球蛋白可變區(qū)相似。EEF1-delta基因編碼延長因子-1復合體的一個亞單位，在蛋白合成中的作用是將攜

4、帶氨基酸的tRNA在酶的作用下連接到核糖體上。這四個基因分別參與基因的轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的各種活動，參與機體免疫活動。本文通過對這四個基因在直腸癌組織及正常直腸組織中表達差異的研究，為結(jié)直腸癌發(fā)病機制的研究提供新思路，亦為研究結(jié)直腸癌的發(fā)病機理提供參考資料。 方法：采用RT-PCR及Real-timePCR檢測直腸癌患者癌組織及對應(yīng)正常直腸組織中HSPE1、SOX9及PIGR基因的表達。采用Real-timePCR及狹線雜交

5、檢測EEF1-delta在直腸癌組織及正常直腸組織中的表達。 結(jié)果：1.Real-timePCR結(jié)果顯示HSPE1及EEF1-delta在癌組織中的表達高于正常直腸組織；而SOX9及PIGR在癌組織中的表達低于正常直腸組織，差異均有顯著性(P＜0.05) 2.RT-PCR結(jié)果顯示HSPE1基因在癌組織中表達升高，PIGR基因在癌組織中表達降低，SOX9基因在癌組織及正常組織中表達無差異。 3.狹線雜交結(jié)果顯示直腸