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文檔簡介
1、目的該課題利用CoCl2模擬缺氧環(huán)境,研究CPR對缺氧狀態(tài)下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HIF-1α表達(dá)的影響,以探討CRP抑制血管新生的機(jī)制.內(nèi)皮細(xì)胞增殖也是血管新生必要條件,該研究同時(shí)觀察CRP對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響,進(jìn)一步了解CRP對血管新生的影響.方法1.培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),用不同濃度COCl2(0,50,100,200,400μM)刺激2
2、4小時(shí),裂解細(xì)胞提取蛋白,考馬斯亮藍(lán)G-250染色法測定總蛋白濃度,用Western blot法測定HIF-1α蛋白濃度.2·利用100μM CoCl2模擬缺氧環(huán)境,分別與0、5、10、50、100μg/ml的CRP同時(shí)作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,24小時(shí)后提取蛋白,用Westernblot方法檢測HIF-1α的表達(dá).3·利用100μM CoCl2模擬缺氧環(huán)境,12小時(shí)后用100μg/ml的CRP刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,分別在刺激前,刺激6,
3、12,24,48小時(shí)后提取蛋白,用Westernblot方法檢測HIF-1α的表達(dá).4·用96孔板培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,添加0、5、10、50、100μg/ml的CRP,24小時(shí)后用MTS方法測CRP對細(xì)胞增殖的影響.結(jié)論CoCl2誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)HIF-1α,說明它可作為模擬缺氧狀態(tài)的物質(zhì).CRP輕度升高即可抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)HIF-1α,抑制細(xì)胞增殖,證實(shí)了CRP抑制血管新生的作用,證明它參與了心血管疾病病理生理過程.
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