低能激光照射提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心肌梗死療效的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文低能激光照射提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心肌梗死療效的實(shí)驗(yàn)研究姓名：侯劍峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：心血管外科指導(dǎo)教師：胡盛壽20090401北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院＆中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士研究生畢業(yè)論文中文摘要(第二部分)：低能激光照射預(yù)處理梗死后心肌組織提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞早期移植存活實(shí)驗(yàn)研究目的：骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞(Bone—marrowmesenchymalstemcells，BMSCs)移植已成為心肌梗死

2、治療的新策略，但是移植后干細(xì)胞存活率低下極大限制了該治療策略的療效。在本部分研究中，我們?cè)O(shè)想低能激光照射(Lowlevellaserirradiation，LLLI)預(yù)處理能夠改善梗死后心肌微環(huán)境，提高移植細(xì)胞早期存活率及細(xì)胞移植的療效。方法：BMSCs取自雄性Sprague—Dawley(SD)大鼠，冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法制作雌性SD大鼠心肌梗死(Myocardialinfarction，MI)模型。3周后，經(jīng)超聲篩選合格心肌梗死大鼠隨機(jī)分組

3、評(píng)價(jià)LLLI預(yù)處理對(duì)梗死后心肌微環(huán)境影響及LLLI預(yù)處理后對(duì)移植后細(xì)胞存活影響。LLLI預(yù)處理采用635nm半導(dǎo)體低能激光(輸出功率：5mW；照射時(shí)間：150秒；能量密度：096J／cm2)開胸單次照射。LLLI預(yù)處理后1小時(shí)、1天、l周，以免疫蛋白印跡法(Westernblotting)和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RealtimePCR)法分別檢測(cè)預(yù)LLLI處理區(qū)內(nèi)心肌組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)岡子(Vascularendothelialgrow

4、thfactor，VEGF)和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(Glucoseregulatedprotein78，GRP78)的表達(dá)，分別以黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法測(cè)定LLLI預(yù)處理區(qū)內(nèi)心肌組織中超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)活性和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量。LLLI預(yù)處理后即刻，于LLLI預(yù)處理的心肌梗死邊帶區(qū)單點(diǎn)注射DAPI標(biāo)記的BMSCs2106個(gè)／50lxi或等體積的無血清細(xì)

5、胞培養(yǎng)液。BMSCs移植后1小時(shí)、1天、l周，RealtimePCR法檢測(cè)移植BMSCs存活，TUNEL法檢測(cè)移植BMSCs凋亡。免疫組化法檢測(cè)梗死區(qū)及梗死邊帶區(qū)新生毛細(xì)血管密度，免疫熒光法檢測(cè)移植BMSCs肌樣細(xì)胞分化，超聲心動(dòng)圖評(píng)價(jià)左心功能。結(jié)果：LLLI預(yù)處理顯著提高了梗死后心肌組織中VEGF、GRP78的表達(dá)及SOD的活性，降低了MDA的含量。盡管在治療后左心功能的改善上LLLIBMSCs組與BMSCs組之間不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但