低能激光照射提高骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療心肌梗死療效的實驗研究.pdf

1、北京協(xié)和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院博士學位論文低能激光照射提高骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療心肌梗死療效的實驗研究姓名：侯劍峰申請學位級別：博士專業(yè)：心血管外科指導教師：胡盛壽20090401北京協(xié)和醫(yī)學院＆中國醫(yī)學科學院博士研究生畢業(yè)論文中文摘要(第二部分)：低能激光照射預處理梗死后心肌組織提高骨髓間充質(zhì)干細胞早期移植存活實驗研究目的：骨髓問充質(zhì)干細胞(Bone—marrowmesenchymalstemcells，BMSCs)移植已成為心肌梗死

2、治療的新策略，但是移植后干細胞存活率低下極大限制了該治療策略的療效。在本部分研究中，我們設想低能激光照射(Lowlevellaserirradiation，LLLI)預處理能夠改善梗死后心肌微環(huán)境，提高移植細胞早期存活率及細胞移植的療效。方法：BMSCs取自雄性Sprague—Dawley(SD)大鼠，冠狀動脈結扎法制作雌性SD大鼠心肌梗死(Myocardialinfarction，MI)模型。3周后，經(jīng)超聲篩選合格心肌梗死大鼠隨機分組

3、評價LLLI預處理對梗死后心肌微環(huán)境影響及LLLI預處理后對移植后細胞存活影響。LLLI預處理采用635nm半導體低能激光(輸出功率：5mW；照射時間：150秒；能量密度：096J／cm2)開胸單次照射。LLLI預處理后1小時、1天、l周，以免疫蛋白印跡法(Westernblotting)和實時定量聚合酶鏈反應(RealtimePCR)法分別檢測預LLLI處理區(qū)內(nèi)心肌組織中血管內(nèi)皮生長岡子(Vascularendothelialgrow

4、thfactor，VEGF)和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(Glucoseregulatedprotein78，GRP78)的表達，分別以黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法測定LLLI預處理區(qū)內(nèi)心肌組織中超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)活性和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量。LLLI預處理后即刻，于LLLI預處理的心肌梗死邊帶區(qū)單點注射DAPI標記的BMSCs2106個／50lxi或等體積的無血清細

5、胞培養(yǎng)液。BMSCs移植后1小時、1天、l周，RealtimePCR法檢測移植BMSCs存活，TUNEL法檢測移植BMSCs凋亡。免疫組化法檢測梗死區(qū)及梗死邊帶區(qū)新生毛細血管密度，免疫熒光法檢測移植BMSCs肌樣細胞分化，超聲心動圖評價左心功能。結果：LLLI預處理顯著提高了梗死后心肌組織中VEGF、GRP78的表達及SOD的活性，降低了MDA的含量。盡管在治療后左心功能的改善上LLLIBMSCs組與BMSCs組之間不存在統(tǒng)計學差異，但