糖尿病大鼠心肌梗死后缺血區(qū)miRNA-503及其靶基因CCNE1和cdc25A的動態(tài)變化.pdf

1、目的:MicroRNA(miRNA)是一類內源性非編碼RNA小分子,主要通過與靶基因3'非翻譯區(qū)(3'-untranslated region,3'UTR)結合促進靶基因mRNA降解或抑制其翻譯,從而在轉錄后水平負調控基因表達。最近研究表明miRNA與心血管疾病密切相關。研究發(fā)現(xiàn)缺血后血管新生修復過程中miRNA表達譜明顯改變,某些特異性的miRNA可調控組織缺血后血管新生。但miRNA-503表達是否參與調節(jié)糖尿病心肌梗死后缺血區(qū)血管

2、新生形成低下這一發(fā)病過程目前鮮有研究報道。本研究通過觀察糖尿病大鼠心肌梗死周邊缺血區(qū)miRNA-503及其靶基因細胞周期素E1(CCNE1)和細胞分裂周期蛋白25A(The cell division cycle 25A,cdc25A)不同時間點表達量變化,旨在探討miRNA-503在心肌缺血區(qū)血管新生中可能的調控作用。
　　方法:選用雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠126只,隨機分為兩組,2型糖尿病組(T2DM)經腹

3、腔注射10％尼克酰胺(Nicotinamid,NA)(230mg/kg),15min后按65mg/kg尾靜脈注射冰浴的1%鏈脲佐菌素(Streptozocin,STZ,pH=4.5)誘導2型糖尿病。年齡與體重相匹配的非糖尿病大鼠組(NDM)經腹腔注射10%尼克酰胺(230mg/kg),15min后按6.5ml/kg尾靜脈注射檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH=4.5)。注射完畢后,普通飼料喂養(yǎng),定期測定空腹血糖及體重。9周造模成功后,2大組

4、又各分為心肌梗死組(AMI)與假手術組(Sham),所有心梗組(AMI)結扎冠狀動脈前降支建立急性心肌梗死模型,假手術組(Sham)只穿線不結扎。4組大鼠分別于假手術或心肌梗死后第3、7、14、28天4個時間點予處死。處死后測量心臟重量指數(shù)(heart weight index,HWI);Masson染色和VIII因子免疫組織化學法分別檢測各組心肌梗死面積及缺血區(qū)新生血管密度;實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測缺血區(qū)miRNA-5

5、03表達量變化;Western blot檢測缺血區(qū)CCNE1和cdc25A蛋白表達水平。
　　結果:(1)與NDM+AMI組相比,DM+AMI組3天時,心臟重量指數(shù),梗死面積、新生微血管密度,兩組相比無明顯差異(p>0.05);而隨著時間延長,心臟重量指數(shù)逐漸降低(p<0.05),梗死面積擴大(p<0.05)、新生微血管密度減少(p<0.05)。(2)與NDM+Sham組相比,DM+AMI組術后3天miRNA-503開始升高,14

6、天表達量達到高峰、28天后仍持續(xù)表達,其上調的倍數(shù)分別為2.15±0.29、3.09±0.7、4.18±0.72、3.82±0.55(p<0.01)。(3)隨著缺血天數(shù)的增加,DM+AMI組缺血區(qū)組織各時間點cdc25A表達量顯著低于同天數(shù)NDM+Sham組,其下調的倍數(shù)分別為0.83±0.1、0.77±0.11、0.53±0.09、0.43±0.09(p<0.05)。而DM+AMI組缺血區(qū)組織各時間點CCNE1表達量與同天數(shù)NDM+S

7、ham組相比,其上調的倍數(shù)分別為0.94±0.14、1.1±0.06、0.98±0.16、1.08±0.1(p>0.05)。(4)Spearman秩相關分析結果顯示:DM+AMI組缺血區(qū)miR-503水平與cdc25A蛋白表達量成負相關(r=-0.748,p=0.005),而與CCNE1蛋白表達不相關(r=-0.245,p=0.443)。
　　結論:2型糖尿病大鼠心肌梗死后缺血區(qū)miRNA-503表達上調,并在轉錄后水平抑制其靶基