三氧化二砷抑制子宮內(nèi)膜癌生長(zhǎng)的體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜癌是三大婦科惡性腫瘤之一，晚期癌或復(fù)發(fā)癌的預(yù)后很差，因此這部分病人的治療是一個(gè)臨床難題，臨床迫切需要作用強(qiáng)且副作用小的新型抗癌藥物。三氧化二砷（AS2O3）是一種新型的抗癌藥物，在臨床上已經(jīng)成功用于治療急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL）的治療，且對(duì)某些實(shí)體瘤體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)其有良好的化療效果，但AS2O3對(duì)子宮內(nèi)膜癌的作用國內(nèi)外鮮為報(bào)道。本研究通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)探討AS2O3對(duì)人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-A細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用及

2、作用機(jī)制，并全面評(píng)價(jià)其毒副作用，為臨床應(yīng)用AS2O3治療子宮內(nèi)膜癌提供基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.用四氮唑鹽法（MTT法）檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，比較AS2O3和黃體酮、安宮黃體酮、順鉑（CDDP）對(duì)HEC-1-A細(xì)胞的抑制作用。
　　 2.應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期
　　 HEC-1-A細(xì)胞經(jīng)5μmol/L AS2O3作用48 h后，蛋白酶消化，收集1×106個(gè)細(xì)胞，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的DNA含量，分

3、析細(xì)胞周期[4]。計(jì)算機(jī)程序擬合分析DNA分布直方圖，以百分?jǐn)?shù)表示各期細(xì)胞（G0/G1、S、G2/M）所占比率。在DNA分布直方圖的G0/G1峰前出現(xiàn)一個(gè)亞峰，為細(xì)胞凋亡峰。
　　 3.DNA電泳檢測(cè)細(xì)胞凋亡
　　 HEC-1-A細(xì)胞經(jīng)5，10μmol/L AS2O3作用48 h后，收集5～10×106個(gè)細(xì)胞，運(yùn)用苯酚-氯仿-無水酒精方法提取DNA[5]，1.2％瓊脂膠電泳后，于紫外線下觀察DNA帶，細(xì)胞凋亡呈典型的梯狀

4、DNA。
　　 4.建立裸鼠荷人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-A細(xì)胞移植瘤動(dòng)物模型，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組即AS2O3低（4 mg·kg-1·d-1）、中（6mg·kg-1·d-1）、高（8 mg·kg-1·d-1）劑量組、陽性對(duì)照順鉑（CDDP）組（3 mg·kg-1·d-1）及陰性對(duì)照生理鹽水（NS）組，腹腔連續(xù)給藥14 d，計(jì)算瘤體積和瘤重量抑制率，觀察用藥前后裸鼠體重改變。
　　 5.毒副作用分析：于停藥后第2日稱體重，“摘眼球

5、”法處死裸鼠，收集血液用于血常規(guī)檢測(cè)，血清用于肝腎功能檢測(cè)；檢測(cè)腫瘤組織以及心、肝、脾、肺、腎和子宮的濕重，各臟器制成蠟塊用于病理檢測(cè)。
　　 6.運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.5對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：AS2O3和CDDP濃度在1～20μmol/L時(shí)可顯著抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，且AS2O3>CDDP。AS2O3（5μmol/L）作用后導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，S和G2/M細(xì)胞周期阻滯。
　

6、　 2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：低、中、高劑量AS2O3組和CDDP組腫瘤體積抑制率分別為：50.97％、75.58％、56.92％、52.23％；腫瘤重量抑制率分別為：10.15％、29.33％、16.67％、14.69％，與生理鹽水組比較差異均有顯著性（P<0.05），可見中高劑量的AS2O3對(duì)移植瘤的抑制作用強(qiáng)于CDDP。
　　 3.裸鼠一般情況觀察：給藥后不久CDDP組裸鼠活動(dòng)明顯減少、精神不振、食量減少，飲水量增加，日漸消

7、瘦，出現(xiàn)明顯惡病質(zhì)表現(xiàn)，在處死前一天該組裸鼠死亡一只。而AS2O3各組及陰性對(duì)照組裸鼠精神狀態(tài)及活動(dòng)均良好，AS2O3各組裸鼠飲食增加。
　　 4.裸鼠體重變化情況：用藥前后AS2O3各組體重變化不明顯，用藥后CDDP組裸鼠體重平均明顯下降（3.74±2.36）g，與AS2O3各組及陰性對(duì)照組之間比較差異有顯著性（P<0.05）。
　　 5.血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果顯示：AS2O3和CDDP對(duì)血紅蛋白含量無明顯影響，與陰性對(duì)照組比

8、較，差異無顯著性（P>0.05）；AS2O3各劑量組白細(xì)胞和血小板數(shù)目與陰性對(duì)照組相比數(shù)量降低，差異有顯著性（P<0.05）。CDDP組裸鼠的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板數(shù)量及血細(xì)胞比容均較陰性對(duì)照組降低，差異有顯著性（P<0.05）。CDDP組與AS2O3各組比較，在紅細(xì)胞、血小板數(shù)目下降方面差異有顯著性（P<0.05），說明CDDP對(duì)血象的影響較AS2O3明顯。
　　 6.肝腎功能檢測(cè)結(jié)果顯示：AS2O3對(duì)肝腎功能較陰性對(duì)照組比較

9、，無顯著性差異（P>0.05），說明AS2O3對(duì)肝腎功能無影響。而CDDP組谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及、總膽紅素、膽堿酯酶等各肝功能指標(biāo)的數(shù)值均有不同程度的升高，AST/ALT比值下降較陰性對(duì)照組比較，有顯著性差異（P<0.05），說明CDDP對(duì)肝功能有不同程度的影響，而且與AS2O3各組比較，差異有顯著性（P<0.05），說明CDDP對(duì)肝功能的影響較AS2O3明顯；CDDP組尿素氮有不同程度的升高，血糖值下降，較陰性對(duì)照組比較，有顯著性

10、差異（P<0.05），說明CDDP對(duì)腎功能有影響，而且與AS2O3各組比較，差異有顯著性（P<0.05），說明CDDP對(duì)腎功能的影響較AS2O3明顯。
　　 7.主要臟器濕重比較及病理學(xué)觀察：AS2O3對(duì)主要臟器濕重?zé)o明顯影響，較陰性對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而CDDP組的心、肝、脾、腎平均濕重較AS2O3各組及陰性對(duì)照組輕，比較差異有顯著性（P<0.05），提示CDDP對(duì)各臟器影響較AS2O3明顯。然而HE染

11、色光鏡下觀察，各組裸鼠臟器均未發(fā)現(xiàn)明顯病灶。
　　 8.免疫組化學(xué)法檢測(cè)移植瘤細(xì)胞中PCNA和p27蛋白表達(dá)情況：陰性對(duì)照組PCNA染色為強(qiáng)陽性，AS2O3中劑量組多為陰性或者弱陽性；陰性對(duì)照組p27染色均為陰性，AS2O3中劑量組多為陽性。
　　 結(jié)論：
　　 1.AS2O3體外和體內(nèi)均具有很強(qiáng)的抑制人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-A細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。
　　 2.AS2O3治療濃度的抗腫瘤作用并不是越高越好，而應(yīng)

12、該采取最適劑量，實(shí)驗(yàn)中以6 mg·kg-1·d-1的劑量最為合適，其抑瘤效果明顯優(yōu)于低、高劑量AS2O3以及CDDP。
　　 3.AS2O3通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和導(dǎo)致S、G2/M期細(xì)胞周期阻滯而抑制HEC-1-A細(xì)胞生長(zhǎng)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明，AS2O3可能通過下調(diào)核增殖抗原PCNA的表達(dá)、上調(diào)抑癌基因p27的表達(dá)，而干擾細(xì)胞周期，抑制腫瘤的生長(zhǎng)。
　　 4.治療劑量的AS2O3對(duì)子宮內(nèi)膜癌 HEC-1-A細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于C