FucT-Ⅶ上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞中粘蛋白endomucin糖基化影響單核細(xì)胞對其粘附機(jī)制研究.pdf

1、血管內(nèi)皮細(xì)胞是連續(xù)覆蓋在全身血管內(nèi)膜的一層細(xì)胞群，研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮層不僅僅是血液和組織的屏障，還具有其他多種功能，鑒于這些生理功能，血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷是諸如動脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病等的始動環(huán)節(jié)。中內(nèi)皮細(xì)胞與單核細(xì)胞的粘附這一過程涉及單核-內(nèi)皮細(xì)胞諸多粘附分子，不僅與細(xì)胞表面的粘附分子表達(dá)量有關(guān)，同時可能與相關(guān)因子的翻譯后修飾（如糖基化）有關(guān)，因此探討內(nèi)皮細(xì)胞膜上功能蛋白的糖基化與功能的關(guān)系對揭示內(nèi)皮-單核細(xì)胞相互作用機(jī)制起著至關(guān)重要的作

2、用。
　　唾液酸化的路易斯酸X(sialyl-Lewis X，sLex)是一種巖藻糖基化產(chǎn)物，參與機(jī)體的一些疾病發(fā)生過程中，其中炎癥反應(yīng)中sLex與選擇素的粘附作用是關(guān)鍵步驟。sLex糖支鏈?zhǔn)峭僖核峄鞍缀铣傻淖詈笠徊?，是在巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶家族(FucT)的催化作用下，將巖藻糖以α1，3-糖苷鍵的形式連接到N-乙酰葡萄糖胺上形成，根據(jù)細(xì)胞類型的不同，F(xiàn)ucT家族可能為FucT-Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ及Ⅶ等。細(xì)胞表面粘蛋白endomucin的

3、糖鏈部分在內(nèi)皮細(xì)胞與單核細(xì)胞粘附過程中發(fā)揮重要作用。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)FucT-Ⅶ及其催化產(chǎn)物sLex與炎癥反應(yīng)有關(guān):通過細(xì)胞粘附實驗，我們觀察到IL-1β處理細(xì)胞后內(nèi)皮細(xì)胞與單核細(xì)胞粘附能力增強(qiáng);qRT-PCR及western blot方法檢測到在IL-1β誘導(dǎo)的炎癥模型中FucT-Ⅶ及其催化產(chǎn)物sLex表達(dá)量均相應(yīng)上調(diào)。采用FucT-Ⅶ基因干擾及過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染EA.hy926細(xì)胞，結(jié)果表明FucT-Ⅶ的表達(dá)量與細(xì)胞粘附能力呈正相關(guān)

4、，與炎癥因子處理的結(jié)果相似。同時還發(fā)現(xiàn)FucT-Ⅶ干擾可阻滯內(nèi)皮細(xì)胞中IL-1β誘導(dǎo)的FucT-Ⅶ及sLex蛋白量上調(diào)，而且降低了IL-1β誘導(dǎo)的細(xì)胞粘附能力的增強(qiáng)。通過特異性抗體封閉粘蛋白endomucin及sLex，可以抑制由于FucT-Ⅶ過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞所增強(qiáng)的內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力。western blot方法檢測到IL-1β處理或FucT-Ⅶ過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞增加endomucin表面sLex糖鏈修飾，但并不影響內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)end

5、omucin蛋白表達(dá)。在相關(guān)的信號通路研究中，我們發(fā)現(xiàn)與單獨給予IL-1β處理組相比，SB203580及PD98059顯著阻滯IL-1β處理所致的FucT-Ⅶ表達(dá)量上調(diào)，而且減少了炎癥因子IL-1β誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞-單核細(xì)胞粘附能力增強(qiáng)?；谏鲜鰧嶒灲Y(jié)果，我們推斷P38-ERK信號通路可能通過調(diào)控FucT-Ⅶ表達(dá)從而影響endomucin粘蛋白介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞-單核細(xì)胞粘附。綜上所述，本研究首次初步闡明粘蛋白endomucin通過FucT-