伊馬替尼對(duì)K562細(xì)胞粘蛋白型O-糖基化的影響.pdf

1、目的：伊馬替尼處理K562細(xì)胞后，分析粘蛋白型腫瘤相關(guān)糖抗原（TACAs）的表達(dá)水平差異；同時(shí)檢測(cè)合成粘蛋白型TACAs的幾種糖基轉(zhuǎn)移酶基因mRNA的表達(dá)水平變化以及ppGalNAc-Ts與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)共定位程度的變化，并初步探討K562細(xì)胞表面異常O-糖基化的原因。初步討論伊馬替尼耐藥的K562細(xì)胞粘蛋白型TACAs及合成這些粘蛋白型TACAs的糖基轉(zhuǎn)移酶基因mRNA的表達(dá)水平變化。
　　方法：（1）伊馬替尼處理K562細(xì)胞后，流式細(xì)

2、胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面粘蛋白型TACAs表達(dá)水平變化；免疫熒光技術(shù)檢測(cè)伊馬替尼處理K562細(xì)胞后，糖基轉(zhuǎn)移酶ppGalNAc-Ts與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的共定位程度的變化。（2）伊馬替尼處理K562細(xì)胞后，RT-PCR檢測(cè)合成粘蛋白型TACAs的糖基轉(zhuǎn)移酶基因mRNA的表達(dá)水平變化。（3）通過逐步提高培養(yǎng)基中伊馬替尼的濃度，篩選得到伊馬替尼耐藥的K562細(xì)胞株，通過RT-PCR、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)和MTT鑒定該耐藥細(xì)胞株；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)K562耐藥細(xì)胞株細(xì)胞表面

3、粘蛋白型TACAs的表達(dá)水平變化，RT-PCR檢測(cè)K562耐藥細(xì)胞株中合成粘蛋白型TACAs的幾種糖基轉(zhuǎn)移酶基因mRNA的表達(dá)水平差異。
　　結(jié)果:（1）伊馬替尼處理K562細(xì)胞后，細(xì)胞表面的Tn抗原表達(dá)上升，而T抗原和唾液酸化的T抗原表達(dá)下降，糖基轉(zhuǎn)移酶ppGalNAc-Ts與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的共定位程度降低。（2）伊馬替尼處理K562細(xì)胞后，ppGalNAc-T2、ST3NAc1、C1Gal-T1、ST6GalNac1和ST6GalNA

4、c4五種糖基轉(zhuǎn)移酶基因的mRNA表達(dá)水平都有不同程度的下降。（3）篩選得到伊馬替尼耐藥的K562細(xì)胞株，其MDR1基因表達(dá)水平明顯增高，細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)鑒定該細(xì)胞株確實(shí)具有耐藥性，并將其命名為K562A；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)K562A細(xì)胞表面Tn抗原和唾液酸化的T抗原表達(dá)水平比K562細(xì)胞高，而T抗原比K562細(xì)胞低。RT-PCR檢測(cè)K562A細(xì)胞株中ppGalNAc-T2、ST3Gal1和ST6GalNAc4三種糖基轉(zhuǎn)移酶基因的mR

5、NA表達(dá)水平比K562細(xì)胞高，而K562A細(xì)胞株中C1Gal-T1和ST6GalNAc1兩種糖基轉(zhuǎn)移酶基因的mRNA表達(dá)水平比K562細(xì)胞低。
　　結(jié)論：（1）伊馬替尼能影響K562細(xì)胞表面Tn抗原、T抗原和唾液酸化的T抗原等粘蛋白型TACAs的表達(dá)。（2）BCR-ABL激酶能增強(qiáng)Src激酶的活性，Src激酶促使ppGalNAc-Ts通過COP I有被小泡從高爾基體運(yùn)送到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，從而使O-糖鏈的合成方式發(fā)生變化，進(jìn)而影響K562細(xì)

6、胞表面粘蛋白型TACAs的表達(dá)，據(jù)此推測(cè)伊馬替尼通過抑制BCR-ABL激酶活性從而可能影響O-糖鏈的起始合成，進(jìn)而影響細(xì)胞表面的粘蛋白型TACAs表達(dá)發(fā)生變化。（3）伊馬替尼還能影響K56細(xì)胞中合成TACAs的糖基轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)，推測(cè)伊馬替尼影響K562細(xì)胞表面粘蛋白型TACAs的表達(dá)還可能是通過抑制相關(guān)糖基轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)而引起的。（4）篩選得到的伊馬替尼耐藥細(xì)胞株K562A高表達(dá)P-糖蛋白，K562A細(xì)胞表面Tn抗原和唾液酸化的T