尾加壓素Ⅱ在低氧性肺動脈高壓中基因表達、合成、釋放及意義的基礎和臨床研究.pdf

1、低氧性肺動脈高壓(hypoxicpulmonaryhypertension，HPH)的發(fā)病機制至今仍未完全闡明，研究表明血管活性物質在肺血管張力調節(jié)和HPH發(fā)病機制中具有十分重要的作用。隨著對血管活性肽的逐一發(fā)現和認識，HPH的發(fā)病機制亦不斷被深化和揭示，尋找新的血管活性物質并探討其在低氧性肺血管收縮和結構改建中的作用和機制始終是該領域的研究重點之一。國外學者最新研究發(fā)現，自然界存在一種新型血管活性肽—尾加壓素H(urotensinⅡ，

2、UⅡ)，其縮血管作用比內皮素還要強大16倍之多。UⅡ最初是從魚脊索中分離出來的，1998年被發(fā)現在靈長類、人體內的中樞神經、心血管、肺等組織中亦能克隆出編碼人UⅡ前體的cDNA。初步研究認為：UⅡ對人和鼠主肺動脈均有收縮作用，對支氣管亦有收縮作用，提示UⅡ可能對肺通氣和肺循環(huán)發(fā)揮調節(jié)作用。但有關UⅡ在低氧性肺血管收縮和血管重構的基因表達、合成與釋放的研究國內外尚未見報道。腎上腺髓質素(adrenomedullin，ADM)亦是近年來發(fā)現

3、的一種新型血管活性肽，研究證明ADM具有擴張血管，降低血壓，抑制血管平滑肌遷移、增殖，抑制縮血管因子的合成與釋放等多種生理作用，因而對人體是一種極為重要的保護因子。目前有關ADM和UⅡ在HPH病理生理過程中相互關系的研究尚少。 目的1.通過動態(tài)觀察COPD患者不同病期的血漿UⅡ和ADM含量，從人體水平探討低氧對UⅡ合成和釋放的影響，以及UⅡ和動脈血氧分壓(PaO2)、肺動脈壓力(PAP)、ADM的關系；2.建立HPH大鼠模型，觀

4、察不同低氧時相大鼠血漿、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中UⅡ和ADM含量的動態(tài)變化，從整體動物水平探討低氧對UⅡ合成和釋放的影響，以及UⅡ和ADM在HPH中的相互關系及其意義；3.通過觀察大鼠肺組織UⅡmRNA的表達及UⅡ蛋白的分布，從分子水平探討低氧對UⅡ基因表達、合成的影響，從而為揭示UⅡ在HPH中的病理生理作用提供實驗依據，為進一步研究HPH發(fā)病機制開拓新思路，并將為防治COPD、肺心病提供新的策略。 方法1.采用放射免疫法

5、(RIA)檢測COPD患者急性加重期和穩(wěn)定期血漿UⅡ和ADM的含量，分析UⅡ與ADM、肺動脈壓力(PAP)和動脈血氧分壓(PaO2)的關系；2.制備HPH大鼠模型，利用右心導管法測定實驗大鼠平均肺動脈壓力(mPAP)和右心室收縮最大上升速率(RVdp/dtmax)，光鏡和電鏡觀察低氧后肺組織病理形態(tài)學的變化；3.采用RIA檢測低氧不同時相大鼠血漿、BALF中UⅡ和ADM含量的變化，分析UⅡ與ADM、mPAP和PaO2的關系；4.采用反轉

6、錄多聚酶鏈反應(RT-PCR)技術、免疫組織化學法(IHC)檢測低氧不同時相大鼠肺組織中UⅡmRNA的表達和UⅡ蛋白的分布。 結果1.與健康對照組比較，COPD患者急性加重期和穩(wěn)定期血漿UⅡ和ADM含量均增高(P＜0.01)，急性加重期高于穩(wěn)定期(P＜0.05)；急性加重期血漿UⅡ含量與PaO2呈負相關(r=-0.788，P＜0.001)，與PAP和ADM含量均呈正相關(r=0.723，r=0.612，P＜0.001)。2.低氧

7、各組大鼠mPAP和RVdp/dtmax均高于對照組(P＜0.01)，PaO2低于對照組(P＜0.01)；低氧各組大鼠肺組織結構破壞增生，肺血管構型重建。3.與對照組比較，低氧各組大鼠血漿和BALF中UⅡ含量升高，低氧20d達高峰(P＜0.001)，30d時呈下降趨勢，但仍高于對照組(P＜0.05)；血漿和BALF中ADM含量亦明顯升高(P＜0.01，P＜0.001)；低氧20d時血漿UⅡ與mPAP呈正相關(r=0.722，P＜0.01)

8、，與PaO2呈負相關(r=-0.721，P＜0.01)；血漿和BALF中UⅡ含量和ADM含量均呈正相關(r=0.846；r=0.942，P＜0.05)。4.UⅡ在實驗各組大鼠肺組織多種細胞中廣泛分布，低氧組肺組織UⅡ蛋白表達增強。5.大鼠肺組織中可檢測到UⅡmRNA；隨低氧時間的延長UⅡmRNA表達量增加，低氧20d和30d表達量明顯高于對照組(P＜0.05)。 結論1、COPD患者急性加重期和穩(wěn)定期血漿UⅡ含量明顯高于健康對照

9、組，且急性加重期高于穩(wěn)定期。2、COPD患者血漿UⅡ含量與PaO2呈負相關，與PAP及血漿ADM含量呈正相關。3、UⅡ在大鼠肺組織中廣泛分布，低氧通過調控基因表達而促進肺組織UⅡ蛋白合成。4、低氧各組大鼠血漿和BALF中UⅡ含量明顯升高，血漿UⅡ含量與PaO2呈負相關，與mPAP及血漿ADM含量呈正相關。5、血漿UⅡ含量在HPH大鼠與COPD患者中的變化趨勢相一致。 研究結果提示：(1)UⅡ既是循環(huán)激素，又以自分泌和/或旁分泌形