脂聯(lián)素在低氧性肺動(dòng)脈高壓發(fā)生中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：低氧性肺動(dòng)脈高壓為肺動(dòng)脈高壓中較常見(jiàn)的一種類(lèi)型，其病因多樣、病情復(fù)雜，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致右心衰進(jìn)而死亡，因此迫切需要闡明其發(fā)病機(jī)制，并為其有效預(yù)防和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究的目的是觀(guān)察重組人球狀脂聯(lián)素（gAd）對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓（HPH）大鼠離體肺動(dòng)脈舒張功能的影響，探討脂聯(lián)素（APN）是否改善肺動(dòng)脈內(nèi)皮功能，并研究其分子機(jī)制。
　　方法：將24只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（Control）、HPH2周組（HPH2W）、HPH

2、4周組（HPH4W），每組8只。正常對(duì)照組動(dòng)物在正常環(huán)境中飼養(yǎng)，低氧組大鼠以間歇性低壓低氧法建立HPH模型。低氧組模型建立后，以右心導(dǎo)管法測(cè)定平均肺動(dòng)脈壓（ mPAP)、平均右心室壓(mRVP)，稱(chēng)重測(cè)量右心室/左心室+室間隔（RV/LV+S）、右心室/體質(zhì)量（RV/BW）；ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)血清APN及NO濃度。右肺下葉肺組織經(jīng)HE染色后觀(guān)察肺小動(dòng)脈血管顯微結(jié)構(gòu)的改變。取大鼠左、右肺動(dòng)脈干制備血管環(huán)，行離體灌流實(shí)驗(yàn)，觀(guān)察不同濃度

3、的乙酰膽堿及硝普鈉誘導(dǎo)的血管舒張作用。取HPH4W組動(dòng)物肺外肺動(dòng)脈干，分組進(jìn)行孵育（HPH4W組：Krebs液孵育；HPH4W+gAd組：gAd2μg/ml孵育；HPH4W+ gAd+L-NAME組：gAd2μg/ml+L-NAME0.5 mmol/L孵育），孵育后觀(guān)察不同濃度的乙酰膽堿及硝普鈉誘導(dǎo)的血管舒張作用，然后收集作用于血管環(huán)的灌流液，檢測(cè) NO產(chǎn)物。取 HPH4W組大鼠肺動(dòng)脈血管按上述分組進(jìn)行孵育，然后行Western blo

4、t檢測(cè)AMPK、Akt、eNOS等信號(hào)蛋白分子的表達(dá)及磷酸化水平。
　　結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，HPH組大鼠的mPAP、mRVP、RV/LV+S、RV/BW均顯著增高（P<0.05）；血清APN、NO水平下降（P<0.05）；光鏡下肺動(dòng)脈平滑肌及彈力纖維層增生，管壁增厚，管腔狹窄。與正常對(duì)照組比較，HPH組大鼠肺動(dòng)脈對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)的血管舒張作用明顯減弱(P＜0.05)，正常對(duì)照組最大舒張率69.9％， HPH2W組最大舒張率48.

5、8%，HPH4W組最大舒張率僅42.1%。經(jīng)gAd體外孵育后，血管環(huán)內(nèi)皮依賴(lài)的舒張作用明顯增強(qiáng)，HPH4W組最大舒張率可達(dá)到46.4%，加入L-NAME組的血管環(huán)舒張作用被顯著阻斷。各組大鼠對(duì)硝普鈉誘導(dǎo)的血管舒張均有良好反應(yīng)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)gAd孵育后的血管環(huán)組織AMPK、Akt、eNOS磷酸化水平、灌流液NO產(chǎn)物均增加（P<0.05），L-NAME可阻斷gAd增強(qiáng)eNOS磷酸化和NO水平的作用。
　　結(jié)論：APN顯著改善間歇性