軟骨發(fā)生過程中基因表達(dá)譜的測定及生物信息學(xué)分析.pdf

1、目的：建立軟骨發(fā)育模型,運(yùn)用基因芯片檢測軟骨發(fā)育過程的基因表達(dá)譜,探討軟骨發(fā)育相關(guān)基因的功能和相互作用關(guān)系，為軟骨發(fā)生(形成)機(jī)制的闡明奠定基礎(chǔ)，為軟骨組織工程提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：建立小鼠胚胎肢芽發(fā)育模型，觀察軟骨發(fā)生的全過程；采用基因芯片技術(shù)進(jìn)行大規(guī)模、高通量的基因表達(dá)譜分析；運(yùn)用生物信息學(xué)分析技術(shù)篩選軟骨發(fā)生的相關(guān)基因；利用體內(nèi)、體外建模、基因轉(zhuǎn)染和分子生物學(xué)技術(shù)等對基因芯片檢測結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 結(jié)果：成

2、功建立了小鼠胚胎肢芽軟骨發(fā)育模型，運(yùn)用Affymetrix mouse 430 2.0全基因組芯片檢測包括軟骨發(fā)育基因在內(nèi)的小鼠全部45000個基因，檢測出的發(fā)育各期的差異表達(dá)基因數(shù)均在2998個，運(yùn)用聚類分析和表達(dá)趨勢分析方法從中篩選出17個基因表達(dá)組群的表達(dá)趨勢，其中包括有99個既往研究顯示與軟骨及骨發(fā)育相關(guān)的熱點(diǎn)基因，同時有已經(jīng)命名但功能尚未探明的基因107個，尚未命名的未知轉(zhuǎn)錄本890個。
　　 結(jié)論：軟骨發(fā)育的關(guān)鍵時期

3、應(yīng)該在E10(間質(zhì)干細(xì)胞)～E14(軟骨)階段。軟骨的發(fā)育是一個涉及多種酶活性調(diào)節(jié)、生長分化調(diào)節(jié)因子，與組織架構(gòu)密切相關(guān)的細(xì)胞骨架、細(xì)胞凋亡(Apoptosis)，以及細(xì)胞周期(Cell cycle)、RNA 轉(zhuǎn)錄、DNA復(fù)制等多個類別和基因族的復(fù)雜調(diào)控過程。這一復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)既包括目前研究結(jié)果所關(guān)注的已知與軟骨發(fā)育相關(guān)的基因，也包括許多功能尚未清楚甚至尚未命名的轉(zhuǎn)錄本，同時與血管、肌肉、神經(jīng)等多種組織器官的發(fā)育存在著復(fù)雜的相關(guān)交差和關(guān)