柑橘接穗和苗木黃龍病病原脫除方法研究.pdf

1、柑橘黃龍病嚴(yán)重影響柑橘產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，目前，我國主要采用傳統(tǒng)的3種方法來對柑橘黃龍病進(jìn)行防控，如:病株的砍除、無病毒苗木的培育和應(yīng)用以及控制傳播媒介柑橘木虱。本實(shí)驗(yàn)利用接穗預(yù)處理試驗(yàn)，篩選了能脫除HLB病原的試劑，并利用在接穗上有一定效果的試劑再對柑橘苗木進(jìn)行脫毒試驗(yàn)，結(jié)合實(shí)時熒光PCR和PCR方法，對試劑處理前后的材料進(jìn)行HLB的驗(yàn)證，從而篩選出對脫除柑橘黃龍病病原有一定效果的藥劑;本試驗(yàn)還對不同地方來源的材料進(jìn)行了柑橘黃龍病的分子檢測和

2、比較分析;并對一種芽孢桿菌進(jìn)行了定殖試驗(yàn)和光學(xué)顯微鏡鑒定。具體研究結(jié)果如下:
　　1.小分子化合物處理柑橘接穗脫除柑橘黃龍病病原的試驗(yàn)(1)2015年12月將29種小分子化合物對柑橘離體枝條進(jìn)行處理，對比化合物處理前和處理后黃龍病病原的q-PCR相對表達(dá)量的變化及病原脫除情況，研究發(fā)現(xiàn)化合物2，5-二溴吡啶、1，2-苯并異噻唑-3-酮、2-肼吡啶、3-(2-溴乙基)吲哚、化合物H、J、O、P、R、Z十種小分子化合物有一定的脫毒效果

3、。(2)2016年3月再利用初步篩選出的十種小分子化合物進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示:2，5-二溴吡啶、1，2-苯并異噻唑-3-酮、化合物Z、O和J較為有效。
　　2.2016年12月利用五種小分子化合物以及十八種藥劑對柑橘接穗進(jìn)行脫除柑橘黃龍病病原試驗(yàn)，結(jié)果表明:苯溴馬隆膠囊、諾氟沙星、阿莫西林分散片、化合物100、化合物106和化合物107脫除柑橘黃龍病病原體百分率均為:33.3％。
　　3.2017年4月用2種抗生素和5種化

4、合物脫除柑橘苗木黃龍病的試驗(yàn)，結(jié)果表明:通過澆灌根系和輸液式滴灌的方法處理柑橘苗木，諾氟沙星脫毒率達(dá)到10％，苗木新梢平均發(fā)生數(shù)為5.2支，新梢平均生長量為14 cm。
　　4.芽孢桿菌GJ1的接種、分離和鑒定:將已有的GJ1菌落的電鏡觀察表明，它表現(xiàn)出:短桿狀，長為1.41-1.49μm，寬為0.54-0.61μm，以二分裂方式進(jìn)行無性繁殖，將GJ1接種到4株柑橘苗木上，然后進(jìn)行芽孢桿菌的分離純化和鑒定，將從葉片中分離出菌落與已

5、知芽孢桿菌菌落在40x顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)比較，發(fā)現(xiàn)分離出的菌落與已知芽孢桿菌菌落形態(tài)大小較為相似;將已分離出的菌落與已知芽孢桿菌菌落分別對其進(jìn)行革蘭氏染色試驗(yàn)，得出分離出的菌落與已知芽孢桿菌都為革蘭氏陽性菌。因此，可初步判定芽孢桿菌GJ1在柑橘植株上已進(jìn)行定殖。
　　5.不同地區(qū)黃龍病的檢測:對來源于海南瓊中縣、福建永春縣、云南保山市、廣西崇左市和海南澄邁縣五個地方來源的樣品進(jìn)行柑橘黃龍病的檢測。不同地方黃龍病病原菌存在差異，q-P