髓源性抑制細(xì)胞在小鼠肝移植耐受中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：髓源性抑制細(xì)胞在小鼠肝移植耐受中的作用研究
　　 [目的]髓源性抑制細(xì)胞(MDSC)是一群新近發(fā)現(xiàn)的，具有強(qiáng)大免疫調(diào)控功能的髓系細(xì)胞群。研究證實(shí)MDSC具有促進(jìn)小鼠胰島細(xì)胞移植耐受的功能，但MDSC在小鼠肝移植(mLT)后免疫耐受過(guò)程中發(fā)揮的作用還不甚清楚。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谘芯啃∈蟾我浦埠笠浦哺蝺?nèi)T細(xì)胞、B細(xì)胞以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)和MDSC的改變對(duì)小鼠肝移植免疫耐受過(guò)程的影響。
　　 [方法]本實(shí)驗(yàn)利用小

2、鼠肝移植模型，在體內(nèi)水平研究了肝移植后移植肝內(nèi)免疫微環(huán)境的改變和MDSC的數(shù)量變化趨勢(shì)，以及MDSC在移植肝耐受過(guò)程中的作用。
　　 [結(jié)果]小鼠異基因肝移植后移植肝內(nèi)T細(xì)胞、B細(xì)胞的數(shù)量明顯增加以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)和MDSC浸潤(rùn)增多；在肝移植后早期(4周以內(nèi))，異基因移植肝內(nèi)有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，肝組織遭到不同程度的破壞；肝移植耐受期(8周后)，移植肝內(nèi)漫潤(rùn)的淋巴細(xì)胞減少，肝細(xì)胞再生，小葉結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常；流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果證實(shí)

3、：在小鼠異基因肝移植的耐受過(guò)程中，MDSC數(shù)量增加，Treg數(shù)量增加，兩者具有線性相關(guān)關(guān)系。
　　 [結(jié)論]小鼠異基因肝移植后，移植肝內(nèi)存在一個(gè)免疫耐受的形成過(guò)程；在此過(guò)程中，移植肝內(nèi)浸潤(rùn)的MDSC和Treg的數(shù)量均大幅上升，提示MDSC可能通過(guò)加強(qiáng)Treg功能調(diào)節(jié)移植肝內(nèi)的免疫耐受過(guò)程。
　　 第二部分：髓源性抑制細(xì)胞在小鼠肝移植耐受中的作用機(jī)制研究
　　 [目的]小鼠肝移植的自發(fā)性免疫耐受一直是移植免疫學(xué)研究

4、的熱點(diǎn)之一，盡管近年的研究指出調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)，肝星狀細(xì)胞，Kupffer細(xì)胞等均在這個(gè)過(guò)程中發(fā)揮了一定的作用，但至今仍無(wú)法很好的解釋自發(fā)性耐受的機(jī)制和原因。第一部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明小鼠肝移植耐受誘導(dǎo)過(guò)程中MDSC在移植肝內(nèi)浸潤(rùn)增多，并與Treg增加具有一定的協(xié)同關(guān)系，這些結(jié)果提示我們：MDSC在小鼠肝移植耐受過(guò)程中扮演了重要的角色，MDSC的免疫負(fù)向調(diào)控功能可能與Tregs有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)的目的在于研究MDSC對(duì)效應(yīng)T細(xì)胞增殖和死亡

5、的影響；Treg在MDSC免疫調(diào)控中的作用；參與MDSC免疫調(diào)控的因子和調(diào)控機(jī)制。
　　 [方法]分離純化同基因和異基因移植肝內(nèi)的MDSC細(xì)胞，與野生型效應(yīng)T細(xì)胞(CD25Tcell)混合培養(yǎng)，在培養(yǎng)體系中加入或不加入野生型Treg，共培養(yǎng)72小時(shí)后，觀察MDSC對(duì)效應(yīng)T細(xì)胞的抑制作用和MDSC與Treg協(xié)同調(diào)控的作用；收集同基因/異基因組小鼠血清樣本，ELISA測(cè)定血清IL-10、IL-35和TGF-β的水平；利用miRNA芯

6、片，找到同基因/異基因移植肝內(nèi)不同的基因表達(dá)，通過(guò)Genbank和文獻(xiàn)比對(duì)，找到與MDSC功能相關(guān)的基因改變。
　　 [結(jié)果]MDSC可以在不依賴Treg協(xié)助的情況下完成誘導(dǎo)效應(yīng)T細(xì)胞死亡的功能；但是，MDSC執(zhí)行抑制效應(yīng)T細(xì)胞增殖的功能時(shí)，必須需要Treg的協(xié)助；ELISA結(jié)果顯示異基因移植組小鼠血清IL-10水平明顯高于同基因移植組；miRNA芯片檢測(cè)和分析結(jié)果共發(fā)現(xiàn)差異基因188個(gè)，經(jīng)軟件預(yù)測(cè)分析和文獻(xiàn)查詢分析后我們共找出

7、11個(gè)與免疫調(diào)控密切相關(guān)的差異基因；RT-PCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)其中有3個(gè)差異基因在兩組間具有顯著性差異，且可能在移植免疫調(diào)控中發(fā)揮重要的作用。通過(guò)miRNA芯片檢測(cè)和分析，我們首次發(fā)現(xiàn)mmu-miR-152-CaMKII-IL6/IL10信號(hào)通路在MDSCs介導(dǎo)的移植免疫調(diào)控起到重要的作用。
　　 [結(jié)論]MDSC通過(guò)促進(jìn)效應(yīng)T細(xì)胞死亡，并與Tregs協(xié)同抑制其增殖，從而在小鼠肝移植耐受誘導(dǎo)過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用；IL-10是MDSC