髓源性抑制細胞在小鼠肝移植耐受中的作用及其機制研究.pdf

1、第一部分：髓源性抑制細胞在小鼠肝移植耐受中的作用研究
　　 [目的]髓源性抑制細胞(MDSC)是一群新近發(fā)現的，具有強大免疫調控功能的髓系細胞群。研究證實MDSC具有促進小鼠胰島細胞移植耐受的功能，但MDSC在小鼠肝移植(mLT)后免疫耐受過程中發(fā)揮的作用還不甚清楚。本實驗目的在于研究小鼠肝移植后移植肝內T細胞、B細胞以及調節(jié)性T細胞(Treg)和MDSC的改變對小鼠肝移植免疫耐受過程的影響。
　　 [方法]本實驗利用小

2、鼠肝移植模型，在體內水平研究了肝移植后移植肝內免疫微環(huán)境的改變和MDSC的數量變化趨勢，以及MDSC在移植肝耐受過程中的作用。
　　 [結果]小鼠異基因肝移植后移植肝內T細胞、B細胞的數量明顯增加以及調節(jié)性T細胞(Treg)和MDSC浸潤增多；在肝移植后早期(4周以內)，異基因移植肝內有大量淋巴細胞浸潤，肝組織遭到不同程度的破壞；肝移植耐受期(8周后)，移植肝內漫潤的淋巴細胞減少，肝細胞再生，小葉結構恢復正常；流式細胞學結果證實

3、：在小鼠異基因肝移植的耐受過程中，MDSC數量增加，Treg數量增加，兩者具有線性相關關系。
　　 [結論]小鼠異基因肝移植后，移植肝內存在一個免疫耐受的形成過程；在此過程中，移植肝內浸潤的MDSC和Treg的數量均大幅上升，提示MDSC可能通過加強Treg功能調節(jié)移植肝內的免疫耐受過程。
　　 第二部分：髓源性抑制細胞在小鼠肝移植耐受中的作用機制研究
　　 [目的]小鼠肝移植的自發(fā)性免疫耐受一直是移植免疫學研究

4、的熱點之一，盡管近年的研究指出調節(jié)性T細胞(Treg)，肝星狀細胞，Kupffer細胞等均在這個過程中發(fā)揮了一定的作用，但至今仍無法很好的解釋自發(fā)性耐受的機制和原因。第一部分的實驗結果說明小鼠肝移植耐受誘導過程中MDSC在移植肝內浸潤增多，并與Treg增加具有一定的協同關系，這些結果提示我們：MDSC在小鼠肝移植耐受過程中扮演了重要的角色，MDSC的免疫負向調控功能可能與Tregs有關。本實驗的目的在于研究MDSC對效應T細胞增殖和死亡

5、的影響；Treg在MDSC免疫調控中的作用；參與MDSC免疫調控的因子和調控機制。
　　 [方法]分離純化同基因和異基因移植肝內的MDSC細胞，與野生型效應T細胞(CD25Tcell)混合培養(yǎng)，在培養(yǎng)體系中加入或不加入野生型Treg，共培養(yǎng)72小時后，觀察MDSC對效應T細胞的抑制作用和MDSC與Treg協同調控的作用；收集同基因/異基因組小鼠血清樣本，ELISA測定血清IL-10、IL-35和TGF-β的水平；利用miRNA芯

6、片，找到同基因/異基因移植肝內不同的基因表達，通過Genbank和文獻比對，找到與MDSC功能相關的基因改變。
　　 [結果]MDSC可以在不依賴Treg協助的情況下完成誘導效應T細胞死亡的功能；但是，MDSC執(zhí)行抑制效應T細胞增殖的功能時，必須需要Treg的協助；ELISA結果顯示異基因移植組小鼠血清IL-10水平明顯高于同基因移植組；miRNA芯片檢測和分析結果共發(fā)現差異基因188個，經軟件預測分析和文獻查詢分析后我們共找出

7、11個與免疫調控密切相關的差異基因；RT-PCR驗證發(fā)現其中有3個差異基因在兩組間具有顯著性差異，且可能在移植免疫調控中發(fā)揮重要的作用。通過miRNA芯片檢測和分析，我們首次發(fā)現mmu-miR-152-CaMKII-IL6/IL10信號通路在MDSCs介導的移植免疫調控起到重要的作用。
　　 [結論]MDSC通過促進效應T細胞死亡，并與Tregs協同抑制其增殖，從而在小鼠肝移植耐受誘導過程中發(fā)揮了重要的作用；IL-10是MDSC