正五聚蛋白3在小鼠睪丸支持細(xì)胞熱應(yīng)激恢復(fù)過程中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、PTX3是在進(jìn)化過程中高度保守的Pentraxins家族的中的一個(gè)多聚體分泌型蛋白。它的表達(dá)受到如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、氧化應(yīng)激、病原體感染一類的應(yīng)激條件，及IL-1、TNF-α、IL-6等炎癥因子的誘導(dǎo)，并在其中發(fā)揮著重要作用。睪丸內(nèi)溫度比正常體溫低2-4℃。高溫能引起睪丸組織損傷，曲細(xì)精管內(nèi)生精細(xì)胞排列松散，并且相關(guān)炎癥因子表達(dá)上升，精子發(fā)生異常。但是短暫的高溫引起的損傷在溫度恢復(fù)后即可自行修復(fù)，說明睪丸具有對(duì)溫度較為敏感的調(diào)控機(jī)制。故應(yīng)激性

2、蛋白PTX3可能參與高溫后精子發(fā)生的恢復(fù)調(diào)節(jié)。利用小鼠睪丸支持細(xì)胞體外培養(yǎng)模型，通過在熱應(yīng)激恢復(fù)階段及熱應(yīng)激前敲低PTX3實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PTX3的表達(dá)和定位變化規(guī)律以及睪丸支持細(xì)胞重要功能蛋白（CEBP-β、p-ERK1/2、細(xì)胞凋亡和增殖相關(guān)蛋白、BTB相關(guān)蛋白，重要分泌型蛋白GDNF、SCF等）的表達(dá)變化規(guī)律，揭示PTX3在支持細(xì)胞熱應(yīng)激恢復(fù)階段細(xì)胞功能性變化過程中的可能作用和機(jī)制。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)短暫高溫處理對(duì)睪丸支

3、持細(xì)胞PTX3的mRNA和蛋白表達(dá)及定位的影響。43℃處理支持細(xì)胞1h后恢復(fù)正常溫度培養(yǎng)一段時(shí)間(0、3、6、12h)，PTX3的mRNA和蛋白表達(dá)量在恢復(fù)后6h顯著升高，之后逐漸下降，定位分布也發(fā)生變化，從胞質(zhì)向細(xì)胞核聚集。
　　(2)短暫高溫處理對(duì)睪丸支持細(xì)胞PTX3上游調(diào)控因子表達(dá)水平的影響。短暫高溫處理(43℃1h)睪丸支持細(xì)胞后，PTX3的上游調(diào)控分子CEBP-β及p-ERK1/2的表達(dá)都顯著升高。推測(cè)短暫高溫處理睪丸引

4、起的精子發(fā)生損傷及其自行修復(fù)可能與p-ERK1/2、CEBP-β、PTX3這一調(diào)控通路有關(guān)。
　　(3)短暫高溫處理對(duì)睪丸支持細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響及與PTX3的可能關(guān)系。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)高溫誘導(dǎo)支持細(xì)胞內(nèi)Bcl-2、CAT的mRNA水平顯著升高，而在熱應(yīng)激前敲低PTX3后則高溫不能顯著誘導(dǎo)Bcl-2、CAT的表達(dá)，同時(shí)支持細(xì)胞的細(xì)胞活性顯著下降，不能正?；謴?fù)到高溫前狀態(tài)。我們推測(cè)高溫誘導(dǎo)支持細(xì)胞內(nèi)PTX3的顯著升高可能與睪丸

5、自身對(duì)高溫的抗性和調(diào)整有關(guān)。
　　(4)短暫高溫處理對(duì)睪丸支持細(xì)胞血睪屏障相關(guān)基因表達(dá)的影響及與PTX3的可能關(guān)系。高溫處理支持細(xì)胞后，血睪屏障相關(guān)蛋白(N-cadherin、β-catenin、ZO-1)的mRNA水平表達(dá)先下降后恢復(fù)，而熱應(yīng)激前干擾PTX3后，高溫誘導(dǎo)的N-cadherin降低則不能恢復(fù)，ZO-1表達(dá)上升，β-catenin的表達(dá)則影響不顯著。這說明高溫誘導(dǎo)的PTX3表達(dá)升高也可能與支持細(xì)胞的血睪屏障功能的恢復(fù)

6、和調(diào)整相關(guān)。
　　(5)短暫高溫處理對(duì)睪丸支持細(xì)胞分泌性功能蛋白表達(dá)的影響及與PTX3的可能關(guān)系。支持細(xì)胞分泌的多種重要功能性蛋白，如GDNF、BMP4、SCF、FasL等，在精原干細(xì)胞自我更新、分化和凋亡過程中起著重要調(diào)節(jié)作用。熱應(yīng)激處理后，在恢復(fù)階段GDNF和FasL的mRNA表達(dá)先升高后下降恢復(fù)正常，但是在熱應(yīng)激前敲低PTX3則兩者下降不能恢復(fù)。說明高溫誘導(dǎo)的PTX3表達(dá)升高可能也與支持細(xì)胞在熱應(yīng)激后的功能恢復(fù)和調(diào)整有關(guān)。<