PTEN基因與肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究.pdf

1、本文對(duì)PTEN基因與肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分：PTEN基因多態(tài)性與肝細(xì)胞肝癌遺傳易感性的相關(guān)性研究。
　　 目的：PTEN是一個(gè)抑癌基因,它控制許多生物學(xué)進(jìn)程,包括細(xì)胞的增殖、遷移和死亡。本課題詣在探討PTEN基因的遺傳多態(tài)性對(duì)肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)患病風(fēng)險(xiǎn)的影響。
　　 方法：通過文獻(xiàn)報(bào)道和生物軟件的預(yù)測(cè),我們篩選出

2、PTEN基因的四個(gè)多態(tài)性位點(diǎn),它們分別為rs34421660、rs10490920、rs532678和rs701848。接著我們采用病例-對(duì)照的研究方法,在中國(guó)漢族人群的134例肝細(xì)胞肝癌患者和215例年齡、性別與之相匹配的正常對(duì)照中,對(duì)PTEN基因上的這四個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。其中多態(tài)性位點(diǎn)rs34421660利用PCR的方法直接進(jìn)行基因分型,另外三個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)利用限制性酶切片段多肽性(PCR-RFLP)方法對(duì)其進(jìn)行基因分

3、型。利用SHEsis生物學(xué)軟件和SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行分析,驗(yàn)證PTEN基因的多肽性是否與肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生有關(guān)。
　　 結(jié)果：PTEN基因的四個(gè)多肽性位點(diǎn)的等位基因和基因型頻率在病例組和正常對(duì)照組之間都沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異,接著根據(jù)它們的基因型數(shù)據(jù)和連鎖不平衡性構(gòu)建了PTEN基因單倍型,統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)單倍型T-C-C-del和T-T-T-ins與肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生有一定的相關(guān)性。
　　 結(jié)論：PTEN基因的單個(gè)核

4、酸多態(tài)性與肝細(xì)胞肝癌易感性無(wú)關(guān),但是它們組成的單倍型可能與中國(guó)漢族人群的肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生有一定的關(guān)聯(lián)性。
　　 第二部分：PTEN基因剪接變異體與肝細(xì)胞肝癌發(fā)生的相關(guān)研究。
　　 目的：研究PTEN基因在肝細(xì)胞肝癌組織中是否存在新的剪接變異體,探討PTEN基因在肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　 方法：提取61例肝細(xì)胞肝癌組織中的總RNA,逆轉(zhuǎn)成cDNA。根據(jù)Genbank上的PTEN基因cDNA序列,設(shè)計(jì)六對(duì)不

5、同的引物并以肝細(xì)胞肝癌組織cDNA為模板分別擴(kuò)增外顯子1-2、1-3、2-4、3—5、4-6和5-7之間的片段,得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行3％瓊脂糖凝膠電泳,比較不同樣本擴(kuò)增出來(lái)的目的條帶異同。
　　 結(jié)果：每對(duì)引物分別做了61例肝細(xì)胞肝癌患者組織,3％瓊脂糖凝膠電泳后發(fā)現(xiàn)每對(duì)引物擴(kuò)增出來(lái)的目的條帶大小相同,與野生型剪接體一致。
　　 結(jié)論：PTEN基因在肝細(xì)胞肝癌中不存在新的剪接變異體,說明在肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展中PTEN可能