Scinderin在肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的功能和機制研究.pdf

1、背景及目的:原發(fā)性肝癌（以下簡稱肝癌）是全球第六高發(fā)的惡性腫瘤，每年新發(fā)病例約100萬。肝癌的發(fā)生受多種腫瘤相關(guān)基因的調(diào)控，包括癌基因的激活及抑癌基因的失活，但確切機制仍不清楚。Scinderin（以下簡稱SCIN）是一種Ca2+依賴的肌動蛋白調(diào)節(jié)蛋白，具有調(diào)節(jié)肌動蛋白的聚合及解聚等功能，其異常表達可導(dǎo)致細胞骨架結(jié)構(gòu)的破壞，促進腫瘤的形成。SCIN與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展、生物學(xué)行為有較密切的關(guān)系。CyclinA1是一種細胞周期調(diào)控蛋白，在

2、細胞的增殖、分裂過程中起著重要的作用，而STAT3的磷酸化激活被發(fā)現(xiàn)與腫瘤的關(guān)系相當密切。
　　本研究旨在解決下述問題:(1)檢測臨床肝癌樣本中SCIN的表達水平。(2)分析SCIN表達水平與肝癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。(3) SCIN在肝癌細胞系中的生物功能。(4)SCIN作用于肝癌的分子機制。
　　方法:
　　1.收集12例肝癌及配對癌旁正常組織，通過Real-time PCR、Western Blot在mR

3、NA和蛋白水平檢測SCIN的表達。另外收集60例肝癌組織，通過免疫組化的方法檢測SCIN在肝癌及癌旁組織中的表達情況;
　　2.通過x2檢驗、t檢驗分析SCIN與肝癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系;
　　3.通過Kaplan-Meier生存曲線分析SCIN與肝癌患者預(yù)后之間的關(guān)系(包括無瘤生存期(DFS)和總體生存時間(OS))，并進行Log-rank檢驗加以驗證;
　　4.通過COX比例模型分析SCIN是否為影響肝癌患者

4、預(yù)后的獨立風(fēng)險因素;
　　5.建立包含SCIN外顯子的PcDNA3.1-SCIN質(zhì)粒和表達SCIN siRNA的GV115質(zhì)粒;轉(zhuǎn)染質(zhì)粒到肝癌細胞系中，通過G418及流式分選篩選出穩(wěn)定高表達SCIN及低表達SCIN的細胞系;
　　6.通過MTT實驗、FACS檢測細胞周期等方法檢測細胞的增殖能力;劃痕實驗、Boyden Chamber實驗檢測細胞的遷移能力;
　　7.通過胸腺缺陷裸鼠皮下荷瘤模型檢測細胞的體內(nèi)增殖能力;<

5、br>　　8.提取細胞的蛋白，利用Western Blot實驗分析常見增殖、轉(zhuǎn)移信號通路蛋白的變化。
　　結(jié)果:
　　1.SCIN在腫瘤組織中表達降低，且SCIN與臨床病理特征（直徑）之間存在著相關(guān)性;
　　2.SCIN高表達患者無瘤生存期(DFS)及總體生存期(OS)均長于SCIN低表達患者，且SCIN可以作為評判患者預(yù)后的獨立風(fēng)險因素;
　　3.上調(diào)SCIN可以顯著抑制細胞的增殖能力;
　　4.SCIN