銅綠假單胞菌產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶的臨床調(diào)查研究.pdf

1、銅綠假單胞菌對多種抗生素表現(xiàn)天然耐藥，由于該菌能高效獲取并傳遞外來DNA片段(如質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、整合子等)所攜帶的遺傳信息．導(dǎo)致了其耐藥機制極其復(fù)雜。近年來銅綠假單胞菌對多種抗生素的耐藥率在不斷增加，已經(jīng)出現(xiàn)一部分對三代頭孢菌素(如頭孢他啶)和亞胺培南耐藥的菌株。對于臨床分離的銅綠假單胞菌，其產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶銅綠假單胞菌的檢測方法，至今臨床實驗室標準化研究所尚無推薦的標準方法。 目的： 研究金屬β-內(nèi)酰胺酶在銅綠假單胞菌

2、中的存在情況，探討產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶銅綠假單胞菌的檢測方法及耐藥機制。分析臨床中分離的同時耐亞胺培南和頭孢他啶銅綠假單胞菌的同源性，為合理應(yīng)用抗生素及臨床微生物實驗室監(jiān)控金屬β-內(nèi)酰胺酶檢測方法提供理論基礎(chǔ)。 方法： 用法國生物梅里埃公司ATB Expression細菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)ID32GN鑒定板條檢測煙臺、淄博兩地區(qū)2004年1月-2006年11月期間的分離銅綠假單胞菌，采用K-B法篩選對亞胺培南和頭孢他啶同時

3、耐藥菌株作為測試菌株。采用EDTA紙片復(fù)合法和E-test法分別檢測測試菌株是否存在產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶菌株，同時用PCR法檢測blaIMP-1和blaVIM-2耐藥基因進行確證：重復(fù)序列引物聚合鏈反應(yīng)(ERIC-PCR)對測試菌株進行基因分型。采用微量稀釋法測定產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶菌株對8種常用抗菌藥物的的最低抑菌濃度(MIC)，分別是亞胺培南，頭孢他啶，頭孢哌酮，慶大霉素，阿米卡星，環(huán)丙沙星，氨曲南，左氧氟沙星。 結(jié)果：

4、 共分離銅綠假單胞菌302株，無重復(fù)分離株，篩選出34株作為試驗菌株。采用EDTA紙片復(fù)合法篩選金屬β-內(nèi)酰胺酶，與E-test法和PCR法結(jié)果相比顯示，EDTA紙片復(fù)合法可用于初篩產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶菌株。本研究結(jié)果為：EDTA紙片復(fù)合法篩選15株產(chǎn)金屬酶菌株：E-test法篩選11株產(chǎn)金屬酶菌株；用PCR法檢測3株blaIMP-1和5株blaVIM-2耐藥基因。采用微量稀釋法檢測產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶銅綠假單胞菌對8種抗菌藥物的最低抑菌濃

5、度(MIC)，結(jié)果顯示產(chǎn)金屬酶菌株呈多重耐藥，尤其是PCR法產(chǎn)金屬酶菌株耐藥呈現(xiàn)為高水平耐藥：阿米卡星抗菌活性最好(60.0％)，其次為環(huán)丙沙星(33.3％)。ERIC-PCR法對測試菌株進行基因分型顯示，主要分為7型，存在散在的克隆菌株。 結(jié)論： (1)臨床分離的銅綠假單胞菌株中存在產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶菌株。 (2)EDTA紙片復(fù)合法方法簡便、結(jié)果可靠，可作為臨床微生物室初篩產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶銅綠假單胞菌的方法；