亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌及金屬β-內(nèi)酰胺酶的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的和意義 銅綠假單胞菌是引起醫(yī)院感染的重要病原體，多重耐藥的銅綠假單胞菌感染可導(dǎo)致臨床治療困難，病死率增加。而亞胺培南是治療多重耐藥銅綠假單胞菌的有效藥物，隨著它的廣泛使用，對(duì)其耐藥的銅綠假單胞菌日益增多。本文分析亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌對(duì)常用抗菌藥物的耐藥性，研究對(duì)亞胺培南的耐藥機(jī)制及所產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶的類型，闡明同濟(jì)醫(yī)院銅綠假單胞菌對(duì)常用抗菌藥物的耐藥性及同源性，為指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物特別是碳青霉烯類，新藥研究及開發(fā)

2、，加強(qiáng)感染控制措施，及時(shí)切斷多重耐藥株的克隆傳播和水平傳播，密切監(jiān)測(cè)耐藥株的變遷及其發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。 方法 收集同濟(jì)醫(yī)院2004年1月～9月亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌存活株29株，瓊脂稀釋法測(cè)定29株銅綠假單胞菌存活株對(duì)常用的10種抗菌藥物的最低抑菌濃度(minimalinhibitoryconcentrations，MIC)。通過雙紙片協(xié)同試驗(yàn)(double-disksynergytesting，DDST)、聚合酶鏈反

3、應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)、序列分析(sequencing)等方法檢測(cè)金屬β-內(nèi)酰胺酶并分析其類型。紫外分光光度法測(cè)定金屬β-內(nèi)酰胺酶的活性。脈沖場(chǎng)凝膠電泳(pulsedfieldgelelectrophoresis，PFGE)分析耐藥菌株的同源性。 結(jié)果 經(jīng)過WHONET5.3軟件分析，同濟(jì)醫(yī)院1998年至2004年銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南的耐藥性呈逐年上升趨勢(shì)，由1998年7.3％上升

4、至2004年14.3％。同濟(jì)醫(yī)院2004年1～9月共分離銅綠假單胞菌193株，對(duì)頭孢噻肟、慶大霉素和四環(huán)素的耐藥率分別為38.5％、42％和93.7％，其余抗菌藥物的耐藥率均低于20％。對(duì)亞胺培南和美羅培南或頭孢他啶交叉耐藥的銅綠假單胞菌分別為15株(11.0％)和14株(7.3％)。 193株銅綠假單胞菌中，亞胺培南耐藥的銅綠假單胞菌(IMP-R-Pae)共39株。IMP-R-Pae和亞胺培南敏感的銅綠假單胞菌(IMP-S-P

5、ae)對(duì)四環(huán)素的耐藥率均在90％以上；對(duì)哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率分別為28.6％和17.9％，差異無顯著性；對(duì)于其他抗菌藥物的耐藥率，IMP-R-Pae組明顯高于IMP-S-Pae組，且差異呈極顯著性。 藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示，存活的29株亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌均為多重耐藥株。頭孢噻肟和頭孢他啶的耐藥率分別為69％和27.6％。氨曲南和阿米卡星的耐藥率均為44.8％，其MIC50和MIC90均為16μg/ml和256μg/m

6、l。亞胺培南和美羅培南的耐藥率分別為93.1％和69％，MIC50和MIC90均為32μg/ml和256μg/ml。29株銅綠假單胞菌中有34.5％(10/29)的菌株對(duì)亞胺培南的MIC＞32μg/ml，屬于高水平耐藥[11][12]。慶大霉素和阿米卡星的耐藥率分別為82.8％和44.8％，MIC50分別是256μg/ml和16μg/ml，MIC90均為256μg/ml。環(huán)丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦和四環(huán)素的耐藥率分別為41.4％、48

7、.3％和100％。 雙紙片協(xié)同試驗(yàn)檢測(cè)29株銅綠假單胞菌中有11株金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性，陽性率為37.9％。金屬β-內(nèi)酰胺酶基因檢測(cè)顯示有2株細(xì)菌產(chǎn)VIM-2型金屬β-內(nèi)酰胺酶(6.9％)。紫外分光光度法檢測(cè)兩株產(chǎn)酶株的酶活性分別為27.35±3.25U,26.58±3.18U。 采用脈沖場(chǎng)凝膠電泳技術(shù)對(duì)29株銅綠假單胞菌進(jìn)行分子分型，PFGE圖譜共分為16個(gè)基因型，A、B、C、D、E、F、G型各有兩株以上，其中D型3株

8、，分別來自器官移植病房(2株)和神經(jīng)內(nèi)科病房(1株)的不同患者，標(biāo)本采集時(shí)間相近，且均使用過呼吸機(jī)輔助呼吸，其余類型各1株，兩株產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶菌株不屬于同一基因型，。 結(jié)論 同濟(jì)醫(yī)院2004年1～9月分離的銅綠假單胞菌，除對(duì)頭孢噻肟、慶大霉素和四環(huán)素耐藥率較高，分別為38.5％、42％和93.7％，對(duì)其他抗菌藥物的耐藥率均低于20％。亞胺培南耐藥的銅綠假單胞菌對(duì)于抗菌藥物的耐藥率均高于亞胺培南敏感組，除四環(huán)素和哌拉西

9、林/他唑巴坦外，差異均呈極顯著性(P＜0.01)，且亞胺培南耐藥的銅綠假單胞菌通常表現(xiàn)為多重耐藥。 29株亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌，對(duì)頭孢噻肟、慶大霉素、美羅培南和四環(huán)素的耐藥率大于60％；對(duì)環(huán)丙沙星、氨曲南、阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦耐藥率相近，為41％～48％；對(duì)頭孢他啶耐藥率最低，為27.6％。 雙紙片協(xié)同試驗(yàn)產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶菌株陽性率為37.9％?；驒z測(cè)只發(fā)現(xiàn)2株產(chǎn)VIM-2型金屬β-內(nèi)酰胺酶。 P