突變減毒志賀樣毒素Ⅰ用于抗腫瘤的應(yīng)用基礎(chǔ)研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文突變減毒志賀樣毒素Ⅰ用于抗腫瘤的應(yīng)用基礎(chǔ)研究姓名：魏楓申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：郝希山任秀寶20070501天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文可以被StxlB亞基抗體阻斷。體外實驗觀察到不同劑量的突變減毒Stxl真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染可以使人卵巢癌SKOV3細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯于G2／M或S期，轉(zhuǎn)染后SKOV3細(xì)胞死亡的主要途徑是壞死。突變減毒Stxl還能夠抑制HUVEC的增殖、遷移能力和管腔形成能力。體內(nèi)實驗顯示突

2、變減毒Stxl真核表達(dá)載體可以抑制裸鼠體內(nèi)SKOV3移植瘤生長，并能夠明顯減少裸鼠體內(nèi)SKOV3移植瘤的微血管密度。確定選用毒性為原毒素毒性1／100和1／1000的突變減毒Stxl編碼序列用于攜帶突變減毒Stxl編碼序列的腺病毒載體的構(gòu)建，并已成功構(gòu)建出相應(yīng)的重組腺病毒。結(jié)論：第一，成功構(gòu)建了編碼1／10、1／100減毒活性的突變減毒Stxl的真核表達(dá)載體。第二，成功建立了分泌性表達(dá)突變減毒Stxl的CHO細(xì)胞株，揭示了減毒Stxl基

3、因轉(zhuǎn)染后的作用機(jī)制，證實StxlA、B亞基的天然信號肽可以被真核細(xì)胞識別，從而使該毒素能夠被基因轉(zhuǎn)移后的真核細(xì)胞分泌。第三，發(fā)現(xiàn)減毒Stxl基因轉(zhuǎn)染可導(dǎo)致人卵巢癌細(xì)胞SKOV3細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯并可引起SKOV3細(xì)胞壞死。提示突變減毒Stxl抗腫瘤的機(jī)制至少包括引起腫瘤細(xì)胞壞死和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞周期阻滯。第四，證明1／10、1／100減毒活性的突變減毒Stxl具有明顯的抗腫瘤血管生成活性，體外實驗中能夠有效地抑制HUVEC的生長及正常功能的

4、發(fā)揮，體內(nèi)實驗中突變減毒Stxl真核表達(dá)載體可以抑制裸鼠體內(nèi)SKOV3移植瘤的血管生成。提示抗血管生成活性可能在減毒Stxl抑制腫瘤生長的作用中占據(jù)重要地位。第五，成功構(gòu)建了攜帶1／100、1／1000減毒活性的突變減毒Stxl編碼序列的重組腺病毒載體，為進(jìn)一步研究不同減毒活性的突變減毒Stxl的抗腫瘤作用及其機(jī)制提供了重要工具?？傊?，本研究證明減毒Stxl能夠通過抗腫瘤增殖作用和抗血管生成作用來抑制腫瘤生長，這一結(jié)果提示減毒Stxl基