大腸桿菌志賀毒素Ⅱ型e突變體和蓖麻毒素誘導(dǎo)Vero細胞凋亡的研究.pdf

1、分類號：立絲￡——論文編號：2 1 1 王1 2 堅生 密級：——貴州大學(xué)2 0 0 6 屆碩士研究生學(xué)位論文大腸桿菌志賀毒素I I 型e 突變體和蓖麻毒素誘導(dǎo)V e r o 細胞凋亡的研究學(xué)科專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：真核生物基因及分子生物學(xué)導(dǎo) 師：王嘉福研究生：李燦中國·貴州·貴陽2 0 0 6 年旦月賽州夭學(xué)碗七學(xué)位論文A b s t r a c t0 b j e c t i v e ：T oi n

2、v e s t i g a t e w h e t h e rs h i g a t o x i nI l ev a r r i a n t e n d r i c i n i n d u c ea p o p t o s i s i nA f r i c ag r e e nm o n k e yk i d e n y c e l l l i n e V e r o ，a n d t h ee x p r e s s i o no f

3、g e n e C a s p a s e - 9 ，B a x ，C a s p a s e - 3 。M e t h o d s ：T h e r a w S t x 2 ew e r e i s o l a t e d i n t h e 4 0 t o 8 0f r a c t i o no fa 黼o n i u m s u l f a t ep r e c i p i t a t i o n 。r i c i n w e r

4、 eP u r i f i e db ya S e p h a r o s e 4 Bc o l u m na n dg e lf i l t r a t i o no na S e p h a d e xG - 1 0 0 ．T h e A f r i c a g r e e nm o n k e y k i d e n y c e l l l i n e V e r o w e r e t r e a t e dw i t hr a

5、 w S t x 2 ea n d r i c i n ．a(chǎn) c r i d i n eo r a n g ea n d e t h i d i u mb r o m i d ef l r o r e s c e n td y e s t a i nm e t h o da n d La d d e r - l i k e p a t t e r n s o fD N A f r a g m e n t sw e r eu s e d

6、t o d e t e c ta p o p t o s i s ．Ex p r e s s i o n o fC a s p a s e 一9 ，B a x ，a n d C a s p a s e - 3 w e r ea s s e s s e db yw e s t e r n -b l o t t i n g ．R e s u l t s ：R a w S t x 2 e i n d u c e dY e r oc e l l

7、t oa p o p t o s i ss t r o n g l yi n t i m e —a n d - d o s e ～d e p e n d a n tm a n n e r ；R a w S t x 2 e i n d u c e d9 0 ％o fv e r oc e l l t oa p o p t o s i sa t t h ec o n c e n t r a t i o na b o v e2 u g ／m i

8、 。r i c i n i n d u c e dV e r oc e l l t o a p o p t o s i si n t i m e - a n d - d o s e ～d e p e n d a n t m a n n e r ；r i c i n i n d u c e d1 8 ％o f V e r o c e l lt oa p o p t o s i s a t t h ec o n c e n t r a t

9、i o na b o v e l u g ／m 1 ．T h e m o r p h o l o g y o fV e r oc h a n g e da s n u c l e a r c o n d e n s a t i o no fc h r o m a t i na n dD N Af r a g m e n t a t i o na f t e rt r e a t e d w i t h2 u g ／m 1 o fr a

10、ws t x 2 ef o r 2 4 ho r a f t e rt r e a t e dw i t hl u g ／m 1 o fr a wr i c i nf o r3 6 h 。A f t e rt r e a t e dw i t hr a ws t x 2 e ，c o m p a r e dw i t ht h e c o n t r o l ，t h e e x p r e s s i o no fB a xh a d

11、ai n c r e a s m e n t ，t h ee x p r e s s i o no fc a s p a s e - 3h a das i g n i f i c a n t i n c r e a s m e n t ，t h e e x p r e s s i o no fC a s p a s e - 9d i d n o t h a v e as i g n i f i c a n td i f f e r e

12、n c e 。A f t e r t r e a t e d w i t hr i c i n ，c o m p a r e d w i t ht h e c o n t r o l ，t h e e x p r e s s i o no f c a s p a s e 一3 h a dai n c r ea s m e n t ，t h e e x p r e s s i o no f B a xh a d a d e c r e a

13、 s et h ee x p r e s s i o no fC a s p a s e - 9d i d n o t h a v ea s i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ．’C o n c l u s i o n s ：S t x 2 ea n dr i c i n i n d u c e dV e r oc e l l st O a p o p t o s i si n t i m e