三氧化二砷聯(lián)合足葉乙甙對(duì)慢性髓系白血病細(xì)胞株(K562)生長的影響.pdf

1、目的：慢性髓系白血病細(xì)胞株(K562)的細(xì)胞遺傳學(xué)特征主要表現(xiàn)為Ph染色體異常，導(dǎo)致bcr/abl融合基因形成。bcr/abl融合基因，可編碼分子量為210kd的bcr/abl融合蛋白(P210)，該蛋白具有明顯增強(qiáng)酪氨酸激酶活性，通過多種信號(hào)途徑，使K562細(xì)胞過度增殖。
　　 三氧化二砷為一種砷劑，對(duì)惡性腫瘤，尤其是血液系統(tǒng)惡性腫瘤，如急性早幼粒細(xì)胞白血病有極佳的治療效果。三氧化二砷主要是通過抑制腫瘤細(xì)胞生長、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋

2、亡和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞部分分化而達(dá)到抗腫瘤作用，也可以通過抑制腫瘤血管生成而起到抗腫瘤效果。
　　 足葉乙甙是細(xì)胞周期特異性抗腫瘤藥物，具有殺傷腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。但足葉乙甙作為一個(gè)細(xì)胞調(diào)亡誘導(dǎo)劑，也具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。
　　 本研究通過三氧化二砷聯(lián)合足葉乙甙對(duì)慢性髓系白血病細(xì)胞(K562)生長的影響，探討三氧化二砷和足葉乙甙的聯(lián)合作用對(duì)K562細(xì)胞生長抑制的作用。從而為三氧化二砷和足葉乙甙聯(lián)合治療慢性髓系白血病提供理論依

3、據(jù)。
　　 方法：應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)慢性髓系白血病細(xì)胞(K562)，觀察三氧化二砷和足葉乙甙對(duì)K562細(xì)胞生長的影響。采用臺(tái)盼藍(lán)拒染法和MTT比色法檢測(cè)K562細(xì)胞生長增殖率和生長抑制率；應(yīng)用AO/EBr熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期。
　　 結(jié)果：
　　 1 K562細(xì)胞形態(tài)的觀察：As2O3和VP-16作用后細(xì)胞趨于凋亡及壞死。另外，VP-16作用后，細(xì)胞體積較對(duì)照明顯增大，隨時(shí)間延長更加明顯

4、。
　　 2 臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)K562細(xì)胞生長增殖率：壞死細(xì)胞著色變藍(lán)。
　　 2.1As2O3作用K562細(xì)胞：同一濃度As2O3，隨作用時(shí)間延長，細(xì)胞增殖率顯著降低；相同作用時(shí)間，隨As2O3濃度增加，細(xì)胞增殖率明顯降低。各組與對(duì)照比較均差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.2VP-16作用K562細(xì)胞：同一濃度VP-16，隨作用時(shí)間延長，細(xì)胞增殖率降低；相同作用時(shí)間，隨濃度增加，細(xì)胞增殖率降低，濃度越高越顯著。各

5、組與對(duì)照比較均差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.3As2O3和VP-16聯(lián)合作用K562細(xì)胞72h:同一濃度As2O3聯(lián)合不同濃度VP-16，隨VP-16濃度增加，細(xì)胞增殖率降低；相同濃度VP-16聯(lián)合不同濃度As2O3，隨As2O3濃度增加，細(xì)胞增殖率降低。各組與對(duì)照比較均差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3 MTT比色法測(cè)定K562細(xì)胞生長抑制率：
　　 3.1As2O3作用K562細(xì)胞：各濃度As2O3，24h有細(xì)

6、胞生長抑制；48h細(xì)胞生長抑制明顯增強(qiáng)；72h細(xì)胞生長抑制最明顯，其中1.25μmol/L濃度的細(xì)胞生長抑制率為51.62±7.03％(p＜0.01)各組與對(duì)照比較均差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)結(jié)果判斷較佳效應(yīng)時(shí)間72h，IC50為1.00μmol/L。
　　 3.2VP-16作用K562細(xì)胞：24h細(xì)胞生長抑制不明顯；48h細(xì)胞生長抑制明顯；72h細(xì)胞生長抑制顯著。72hIC50為0.95μg/ml，在0.63-1.25μg/ml

7、之間。各組與對(duì)照比較均差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.3As2O3和VP-16聯(lián)合作用K562細(xì)胞72h:同一濃度As2O3聯(lián)合VP-16，隨VP-16濃度增加，細(xì)胞生長抑制率升高；相同濃度VP-16聯(lián)合As2O3，隨As2O3濃度增加，細(xì)胞生長抑制率也升高。各組與對(duì)照比較均差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4 熒光染色檢測(cè)K562細(xì)胞作用72h凋亡率：活細(xì)胞核呈黃綠色均勻熒光；凋亡細(xì)胞核呈黃綠色致密濃聚在核膜內(nèi)側(cè)、胞膜呈泡狀

8、膨出；壞死細(xì)胞呈橙紅色熒光。
　　 4.1As2O3作用72h，K562細(xì)胞凋亡率隨濃度增加而增加，然后下降。與對(duì)照比較(p＜0.01)各組與對(duì)照比較均差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.2VP-16作用72h，K562細(xì)胞凋亡率隨濃度加大而增加。與對(duì)照比較(p＜0.05)各組與對(duì)照比較均差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.3As2O3和VP-16聯(lián)合作用K562細(xì)胞72h:同一濃度As2O3，隨VP-16濃度增加，細(xì)胞

9、凋亡率增加；相同濃度VP-16，細(xì)胞凋亡率隨As2O3濃度加大而升高。如0.25μmol/LAs2O3聯(lián)合0.16、0.31、0.63、1.25μg/mlVP-16，細(xì)胞凋亡率為26.51士3.62％、28.75士4.31％、55.76±8.67％、65.53士6.38％(p＜0.05);1.25μg/mlVP-16聯(lián)合2.50、5.00、10.00μmol/LAs2O3，細(xì)胞凋亡率為65.53士6.38％、69.59士7.46％、78

10、.52士8.23％(p＜0.05)各組與對(duì)照比較均差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)K562細(xì)胞作用72h細(xì)胞周期：
　　 5.1As2O3作用后，隨As2O3濃度增加，K562細(xì)胞G0/G1期比例逐步增高，S期細(xì)胞逐漸減少。
　　 5.2VP-16作用后，K562細(xì)胞出現(xiàn)異倍體，隨VP-16濃度增加，異倍體比例明顯增加，異倍體中G0/G1期比例顯著升高(＞90％)；二倍體比例明顯減少，二倍體中G0/

11、G1期比例逐步增高，S期細(xì)胞逐漸減少。
　　 5.3As2O3和VP-16聯(lián)合作用K562細(xì)胞后，細(xì)胞出現(xiàn)異倍體，同一濃度As2O3隨VP-16濃度增加，異倍體比例增加，異倍體中G0/G1期比例顯著升高(＞90％)：二倍體比例減少，二倍體中G0/G1期比例逐步增高，S期細(xì)胞逐漸減少。相同濃度VP-16隨As2O3濃度增加，異倍體比例增加，異倍體中G0/G1期比例顯著升高(＞90％)；二倍體比例減少，二倍體中G0/G1期比例逐步增

12、高，S期細(xì)胞逐漸減少。
　　 結(jié)論：
　　 1 在一定的濃度和時(shí)間范圍內(nèi)，三氧化二砷顯著抑制K562細(xì)胞株生長，其抑制作用與劑量、時(shí)間呈依賴性。
　　 2 在一定的濃度和時(shí)間范圍內(nèi)，足葉乙甙明顯抑制K562細(xì)胞株生長，其抑制作用與劑量、時(shí)間呈依賴性。
　　 3 三氧化二砷和足葉乙甙聯(lián)合應(yīng)用對(duì)K562細(xì)胞株的生長抑制作用具有協(xié)同作用。
　　 4 三氧化二砷聯(lián)合足葉乙甙在彼此皆使用超低劑量的情況下抑制